去氧膽酸鈉、2,6-二氯苯腈和LHRH-PE40毒性的動物實驗研究.pdf

1、摘要1:
　　第一部分去氧膽酸鈉和2,6-二氯苯腈致鼻粘膜毒性的形態(tài)與功能研究
　　目的:研究去氧膽酸鈉和2,6-二氯苯腈局部或全身給藥對鼻粘膜的影響,建立藥物對鼻腔形態(tài)和功能影響的評價方法。
　　方法:
　　1.去氧膽酸鈉對wistar大鼠鼻粘膜的影響:
　　(1)分離大鼠鼻呼吸部粘膜,獲得離體呼吸部粘膜纖毛模型,分別置于濃度為0.0001g/mL、0.001g/mL和0.01g/mL的去氧膽酸鈉溶液中,

2、顯微鏡觀察并測定纖毛的擺動頻率。
　　(2)采用滴鼻法于大鼠兩側(cè)鼻腔同時滴入濃度為0.01g/mL的去氧膽酸鈉,每側(cè)10μL,每天1次,連續(xù)7天,末次給藥2小時后分離出鼻呼吸部粘膜,顯微鏡觀察并測定纖毛擺動頻率;末次給藥24小時后取鼻,脫鈣處理、HE染色,光鏡觀察。
　　2.去氧膽酸鈉對 beagle犬鼻粘膜的影響:采用噴霧法于犬兩側(cè)鼻腔同時噴入濃度為0.01g/mL的去氧膽酸鈉,每側(cè)100μL,每天1次,連續(xù)7天,末次給藥

3、2小時后,分別用印度墨汁和核素標記的白蛋白為示蹤劑,測定鼻呼吸部粘膜纖毛的輸送速度;末次給藥24小時后分離鼻呼吸部粘膜,常規(guī)制片,掃描電鏡和透射電鏡觀察。
　　3.2,6-二氯苯腈對wistar大鼠鼻粘膜的影響:配制濃度為0.04g/mL的2,6-二氯苯腈溶液,經(jīng)兩種途徑分別給藥,每天1次,連續(xù)7天。其中腹腔給藥,每次1mL/kg體重;雙側(cè)鼻孔滴鼻給藥,每次每側(cè)10μL。光鏡、透射電鏡觀察鼻腔嗅部粘膜的結(jié)構(gòu)變化。
　　結(jié)果:

4、
　　1、離體鼻呼吸部粘膜纖毛模型實驗顯示,濃度為0.001g/mL及0.01g/mL的去氧膽酸鈉可導(dǎo)致大鼠鼻腔呼吸部粘膜上皮纖毛擺動停止;濃度為0.0001g/mL對纖毛擺動無明顯影響。
　　2、去氧膽酸鈉連續(xù)7天滴鼻給藥,分離的大鼠鼻呼吸部粘膜上皮的纖毛擺動未見明顯的異常。光鏡下可見鼻粘膜慢性炎癥性改變,表現(xiàn)為粘膜上皮及固有膜內(nèi)有較多的淋巴細胞、單核細胞浸潤。
　　3、去氧膽酸鈉連續(xù)7天鼻腔噴霧給藥,掃描電鏡顯示犬

5、鼻腔呼吸部粘膜上皮的纖毛脫落,透射電鏡顯示纖毛融合;印度墨汁和單光子發(fā)射型CT(SPECT)核素掃描測定結(jié)果顯示,鼻粘膜上皮纖毛運輸速度減慢。
　　4、2,6-二氯苯腈連續(xù)7天腹腔給藥,光鏡及電鏡觀察發(fā)現(xiàn)大鼠鼻腔嗅部粘膜 bowman腺明顯減少,殘留的bowman腺呈變性改變,表現(xiàn)為 bowman腺的腺腔不規(guī)則,細胞形態(tài)不規(guī)則,胞核及胞漿濃染;而連續(xù)7天滴鼻給藥,鼻腔嗅部粘膜未見明顯變化。
　　結(jié)論:
　　1、去氧膽酸

6、鈉可導(dǎo)致離體大鼠粘膜上皮纖毛擺動停止、在體大鼠鼻粘膜慢性炎癥,也可導(dǎo)致犬纖毛上皮脫落、纖毛輸送功能降低,去氧膽酸鈉對鼻粘膜有明顯的毒性。
　　2、本研究采用的體內(nèi)外纖毛擺動頻率測定、呼吸粘膜上皮的形態(tài)學(xué)觀察、纖毛輸送功能的檢查等方法,客觀反映了去氧膽酸鈉對鼻粘膜的毒性,可作為鼻粘膜及其纖毛損傷的系統(tǒng)評價方法,對鼻腔給藥制劑、全身給藥對鼻腔結(jié)構(gòu)功能影響的評價有實用意義。
　　3、腹腔注射2,6-二氯苯腈可引起大鼠嗅粘膜bowm

7、an腺萎縮和變性改變,表明2,6-二氯苯腈對鼻粘膜有明顯的毒性。
　　摘要2:
　　第二部分LHRH-PE40的非臨床安全性研究
　　目的:LHRH-PE40是由LHRH和綠膿桿菌外毒素構(gòu)成的融合蛋白,用來作為治療腫瘤的藥物,為研究其毒性,而進行本試驗。
　　方法:小鼠、大鼠和猴的單次或多次反復(fù)靜脈或腹腔給藥,觀察動物臨床體征、血液學(xué)、血液生物化學(xué)以及病理學(xué)檢查的改變。
　　結(jié)果:用bliss法分別計算LH