丁苯酞注射液對(duì)VCI大鼠海馬神經(jīng)元.pdf

1、目的:
　　 本研究在Wistar大鼠認(rèn)知功能障礙(VCI)模型的基礎(chǔ)上，結(jié)合病理檢測(cè)、認(rèn)知功能檢測(cè)和免疫組化蛋白定量、熒光定量PCR-mRNA檢測(cè)、流式細(xì)胞儀Ca2+定量，以及用丁苯酞注射液干預(yù)后的Calbindin-D28k(CaBP)表達(dá)的對(duì)比。初步探討CaBP在凋亡神經(jīng)細(xì)胞中的作用及丁苯酞注射液的保護(hù)作用。
　　 方法:
　　 所有動(dòng)物造模前先用Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)進(jìn)行篩選，淘汰學(xué)習(xí)記憶能力差的

2、大鼠，獲得250g-300g健康雄性Wistar大鼠36只。將36只合格大鼠稱重，排序，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為3組:正常組(normalgroup)(n=4)、VCI模型組(model group)(n=16)、藥物組(drug inerwentiongroup)(n=16)。利用雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎術(shù)(2-VO)建立大鼠VCI模型。按照造模后處死時(shí)間將3組隨機(jī)分為一周組(1W)、2周組(2W)、4周組(4W)、8周組(8W)四個(gè)亞組，正

3、常組每組1只，其余分組每個(gè)亞組4只動(dòng)物。用Morris水迷宮定位航行及空間探索實(shí)驗(yàn)對(duì)8W大鼠的記憶及學(xué)習(xí)能力進(jìn)行測(cè)定;采用HE染色觀察病理學(xué)變化;應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)CaBP在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化;采用熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)CaBP-mRNA表達(dá)的變化。采用流式細(xì)胞儀測(cè)定海馬細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度。
　　 結(jié)果:
　　 1、免疫組化:正常組各時(shí)間點(diǎn)可見CaBP免疫陽性細(xì)胞正常表達(dá)，模型組1W時(shí)表達(dá)高于正常組，1W以

4、后免疫陽性細(xì)胞表達(dá)逐漸下降，且均低于正常組。藥物組較正常組高表達(dá)，1W-8W逐漸下降，至8W時(shí)降至正?；蛏缘陀谡＝M(P＞0.05)。其中1W、2W、4W組與正常組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。同時(shí)間點(diǎn)藥物組與模型組比較，藥物組CaBP免疫陽性細(xì)胞數(shù)目較多，表達(dá)差異均有顯著意義(P＜0.05)。
　　 2、熒光定量PCR: CaBP-mRNA的熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果示1-8W總體表達(dá)逐漸下降，藥物組1W、2W高表達(dá)，4W組稍

5、高表達(dá)，8W組降至正?；蛏缘陀谡＝M(P＞0.05)，與免疫組化結(jié)果吻合。模型組總體表達(dá)亦呈下降趨勢(shì)，1W時(shí)高表達(dá)，1W后明顯低于正常組。藥物組1、2、4W組與正常組表達(dá)有差異(P＜0.05)，8W組與正常組同一水平(P＞0.05)。模型組1W、4W、8W組較正常組表達(dá)有差異(P＜0.05)，2W組與正常組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組與藥物組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)均有差異，表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異意義(P＜0.05)。
　　 3、細(xì)胞內(nèi)Caa2

6、+模型組各時(shí)間點(diǎn)均高表達(dá)，較正常組、與藥物組有明顯的差異(P＜0.05)。藥物組1W、2W組稍高表達(dá)，較正常組無明顯差異(P＞0.05)，4W、8W組高表達(dá)，較正常組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、大鼠慢性腦缺血損傷后CaBP參與了大鼠腦缺血神經(jīng)元凋亡的病理生理過程，可降低細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，避免鈣超載，起到神經(jīng)保護(hù)作用;
　　 2、丁苯酞注射液可促進(jìn)海馬細(xì)胞內(nèi)CaBP的表達(dá)，改善