宮內(nèi)缺氧及當(dāng)歸注射液對(duì)幼年大鼠齒狀回神經(jīng)元與學(xué)習(xí)記憶的影響.pdf

1、目的：探討宮內(nèi)缺氧對(duì)幼年大鼠海馬齒狀回神經(jīng)元與學(xué)習(xí)記憶的影響與NMDAR1 mRNA在其新生鼠海馬齒狀回的表達(dá)的關(guān)系，并研究當(dāng)歸對(duì)其的保護(hù)作用。 方法：健康SD孕鼠30只，隨機(jī)分為對(duì)照組、缺氧組和當(dāng)歸組各10只。于孕14d開(kāi)始將缺氧組孕鼠置于三氣培養(yǎng)箱中，缺氧2h/d，連續(xù)缺氧5d，制作胎鼠宮內(nèi)缺氧模型，每天缺氧前1h經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水（8mL/Kg），連續(xù)7d（孕14d—20d，孕19d和孕20d雖不缺氧但仍注射生理鹽水）；

2、當(dāng)歸組用當(dāng)歸注射液代替生理鹽水，余同缺氧組；對(duì)照組不缺氧，余同缺氧組。三組孕鼠分娩（孕21d）當(dāng)日每窩隨機(jī)選取新生鼠2只，取腦組織、40g/L多聚甲醛固定，石蠟包埋；余新生鼠每窩隨機(jī)選取2只飼養(yǎng)至30d（30日齡），進(jìn)行為期11d的Morris水迷宮測(cè)試，水迷宮測(cè)試結(jié)束當(dāng)日，幼鼠經(jīng)40g/L多聚甲醛灌注固定、取腦，石蠟包埋，切片。新生鼠腦組織作NMDAR1 mRNA原位雜交、幼年大鼠腦組織作NSE mRNA原位雜交（ISH）。操作步驟：

3、①切片常規(guī)脫蠟至水（試劑中加入DEPC）。②胃蛋白酶消化，暴露核酸探針結(jié)合位點(diǎn)（18℃—23℃，胃蛋白酶濃度：1．5mL30g/L檸檬酸加2滴胃蛋白酶，消化6min）。③10g/L多聚甲醛后固定。④滴加預(yù)雜交液，40℃3h。⑤滴加探針雜交液，加蓋專(zhuān)用蓋片，40℃過(guò)夜。⑥沖洗后滴加生物素化鼠抗地高辛，室溫2h。⑦滴加生物素化過(guò)氧化物酶，室溫30min。⑧滴加SABC—POD，室溫30min。⑨DAB避光顯色5—10min（鏡下控制顯色時(shí)間

4、）。⑩切片常規(guī)脫水、透明、封片。每張切片在400倍下用OLYMPUS Ax—70顯微成像系統(tǒng)對(duì)海馬齒狀回拍照。IPP6．0軟件圖像分析。水迷宮實(shí)驗(yàn)記錄探查訓(xùn)練時(shí)幼鼠在目標(biāo)象限的搜索時(shí)間（T1）和對(duì)位探查訓(xùn)練時(shí)幼鼠在目標(biāo)象限的搜索時(shí)間（T2）。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：組間比較用方差分析，兩兩比較用LSD檢驗(yàn)。 結(jié)果：Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)顯示缺氧組幼年大鼠探查測(cè)試和對(duì)位探查測(cè)試時(shí)間較對(duì)照組縮短，當(dāng)歸組較缺氧組延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．0

5、5）。NSE mRNA原位雜交結(jié)果顯示缺氧組大鼠海馬齒狀回陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量和積分光密度（integral optical density，IOD）值均較對(duì)照組減小，當(dāng)歸組較缺氧組增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）；NMDAR1 mRNA原位雜交顯示缺氧組大鼠海馬齒狀回陽(yáng)性細(xì)胞IOD值較對(duì)照組增大，當(dāng)歸組較缺氧組減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。 結(jié)論：⑴一定時(shí)間（2h/d，持續(xù)5d）、一定氧濃度（氧濃度130mL/L）的宮