自噬對海馬損傷后齒狀回神經(jīng)發(fā)生的調(diào)控.pdf

1、目的：探討成年大鼠海馬CA1區(qū)毀損后，海馬齒狀回(dentate gyms，DG)神經(jīng)發(fā)生區(qū)的新生細(xì)胞的存活與自噬的關(guān)系。并觀察齒狀回神經(jīng)發(fā)生與學(xué)習(xí)記憶能力的關(guān)系。 方法：建立海人酸(kainic acid，KA)毀損單側(cè)海馬CAl區(qū)的腦損傷模型。用5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine，BrdU)于毀損后三天標(biāo)記增殖的細(xì)胞，免疫組織化學(xué)檢測BrdU陽性細(xì)胞，采用體視學(xué)的計(jì)數(shù)方法計(jì)算DG的BrdU陽性細(xì)胞總

2、數(shù)。用Westem blot方法檢測自噬特異性抗原LC3(microtubule associatedprotein-1 light chain 3)、Beclin 1、凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的激活水平，用LC3、Beclin1與BrdU免疫熒光雙標(biāo)的方法檢測這些新生細(xì)胞的減少是否有自噬的參與，用Y迷宮訓(xùn)練成績的優(yōu)劣評定新生細(xì)胞的存活與學(xué)習(xí)記憶能力的關(guān)系。 結(jié)果：假毀損組DG區(qū)可見少量的BrdU陽性細(xì)胞；與假毀損組比較，實(shí)驗(yàn)組在

3、海馬毀損后DG區(qū)BrdU陽性細(xì)胞明顯增多(P<0.05)，在BrdU給藥后第一天最多，隨著時(shí)間的推移逐漸減少，各組之間有顯著差異(P<0.05)；Westem blot結(jié)果顯示，與假毀損組比較，實(shí)驗(yàn)組在海馬毀損后各時(shí)間的自噬特性性抗原LC3、Beclin1水平都明顯增高(P<0.05)，與假毀損組比較，實(shí)驗(yàn)各組的Bcl-2水平都明顯降低(P<0.05)；各時(shí)間點(diǎn)均未見BrdU和LC3、Beclin 1的免疫組化雙標(biāo)細(xì)胞；Y迷宮訓(xùn)練結(jié)果顯