丁苯酞預(yù)處理對腦缺血再灌注大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)和白介素-1β的影響.pdf

1、缺血性腦卒中是目前高發(fā)病、高致殘、高致死率,嚴(yán)重危害人類的健康的疾病。腦缺血的發(fā)生會使神經(jīng)細(xì)胞大量壞死并凋亡,尤其是神經(jīng)細(xì)胞對缺血性的損害異常敏感,可引發(fā)嚴(yán)重甚至不可逆性的神經(jīng)缺失癥狀。所以,提高神經(jīng)細(xì)胞對缺血性損害的耐受力,調(diào)動機(jī)體的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制,使神經(jīng)細(xì)胞在受到較嚴(yán)重的缺血打擊下能保持膜功能的完整性,減少損傷,確保這些神經(jīng)細(xì)胞在復(fù)流后仍具有正常生理功能,是治療缺血性腦血管病的一個重要內(nèi)容。目前全球都在高度重視對其發(fā)生機(jī)制及應(yīng)對辦法

2、的研究。現(xiàn)有研究表明,應(yīng)用藥物模擬或誘導(dǎo)一些物質(zhì)如腺苷、HSP等的表達(dá),可使神經(jīng)細(xì)胞對缺血性損傷產(chǎn)生耐受力。消旋-3-正丁基苯酞(簡稱NBP)是治療急性缺血腦卒中的一類化學(xué)藥物,對急性缺血性腦卒中患者的中樞神經(jīng)功能的損傷有改善作用,可促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)。最近國內(nèi)外有多篇關(guān)于丁苯酞腦保護(hù)的資料多集中在對缺血性腦血管病的治療上,但是,丁苯酞預(yù)處理能否提高神經(jīng)細(xì)胞對腦缺血的耐受性仍處于初期研究階段。目前對于丁苯酞預(yù)處理在缺血再灌注損傷中的作用

3、機(jī)制中,細(xì)胞凋亡途徑中的線粒體途徑、死亡受體介導(dǎo)途徑研究較多,包括缺血性神經(jīng)元凋亡通路中細(xì)胞色素C的釋放、線粒體釋放的凋亡蛋白-Smac/DIABLO、Caspase家族3、8、以及HSP-70等,均發(fā)現(xiàn)丁苯酞的神經(jīng)保護(hù)作用。炎性反應(yīng)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)急、慢性病變的主要損傷機(jī)制之一,異常激活的腦膠質(zhì)細(xì)胞參與這一重要的疾病病理進(jìn)程。白細(xì)胞介素-1(interleukin-1, IL-1)系統(tǒng)分子主要包括白介素-1α和白介素-1β,廣泛分布于中

4、樞神經(jīng)系統(tǒng)。應(yīng)激引發(fā)的白介素-1增加不僅表現(xiàn)在外周組織如血液、脾臟,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一些腦區(qū)如大腦皮層、下丘腦、海馬也有表達(dá)。白介素-1β是一種炎癥介質(zhì),其具有多向性生物功能,能夠有效調(diào)節(jié)炎癥和免疫反應(yīng)。多項(xiàng)研究表明,在缺血損傷后白介素-1β的過度表達(dá)會加重大腦皮質(zhì)神經(jīng)元的損害。
　　目的:
　　觀察丁苯酞預(yù)處理后大鼠大腦皮質(zhì)梗死范圍、神經(jīng)功能缺損、電鏡下大腦皮質(zhì)超微結(jié)構(gòu)變化,及白介素-1β含量的變化,以進(jìn)一步探討預(yù)防性應(yīng)用

5、丁苯酞對大腦皮質(zhì)神經(jīng)元的保護(hù)作用,并能否與他汀、阿司匹林一樣,作為腦血管病高危因素患者的一級預(yù)防用藥,從而為預(yù)防腦血管病發(fā)生提供新的思路和方法。
　　方法:
　　選取160只雄性SD大鼠,分為假手術(shù)組(Sham組)、缺血再灌注組(IR組)、NBP低劑量預(yù)處理組(NBP低劑量組)、NBP中劑量預(yù)處理組(NBP中劑量組)和 NBP高劑量預(yù)處理組(NBP高劑量組),每組32只,NBP預(yù)處理組于大腦中動脈堵塞前1周起給予大鼠每日一次

6、丁苯酞灌胃,IR組及Sham組給予生理鹽水灌胃。采用Longa改良線栓法制備大鼠右側(cè)大腦中動脈缺血再灌注模型,缺血2小時,再灌注24小時。大鼠清醒后進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分,TTC檢測梗死體積,檢測大腦皮質(zhì)白介素-1β指標(biāo),觀察皮質(zhì)神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、炎性細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)改變。
　　結(jié)果:
　　1、各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分比較
　　IR組、NBP預(yù)處理低劑量、中劑量、高劑量四組間比較,NBP組均較IR組評分減少,NBP組間

7、兩兩比較結(jié)果顯示無明顯差異(P>0.05),但NBP高劑量組和NBP中劑量組與IR組比較均有顯著性意義(P<0.01)。
　　2、TTC檢測梗死體積比較結(jié)果
　　用TTC法檢測IR組、NBP低劑量、NBP中劑量和NBP高劑量組梗死體積,NBP各組較IR組比較梗死體積均縮小,有顯著性差異(P<0.01);NBP高劑量組較中、低劑量組梗死體積縮小,比較有顯著性差異(P<0.01)。
　　3、HE染色結(jié)果
　　HE染色

8、可見:Sham組:正常,未見明顯神經(jīng)元變性、壞死等病理改變。NBP組出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞形態(tài)及結(jié)構(gòu)的異常,胞體和胞核固縮甚至核破裂,但相對于IR組數(shù)量減少,程度較弱,且NBP高劑量組較中、低劑量組的神經(jīng)元損傷更輕微。
　　4、透射電鏡觀察各組大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、炎性細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)結(jié)果
　　Sham組:正常的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)。IR組:大腦皮質(zhì)神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重,炎性細(xì)胞浸潤。NBP各組較IR組比較,大腦皮質(zhì)神經(jīng)元結(jié)

9、構(gòu)壞死、溶解程度及線粒體損傷較輕,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞損傷有所減輕。
　　5、各組白介素-1β含量數(shù)值比較
　　與 Sham組比較,余各組大腦皮質(zhì)白介素-1β含量均明顯增高(P<0.01),NBP低劑量組白介素-1β含量較IR組減少(P<0.05),NBP中、高劑量組白介素-1β含量較IR組減少(P<0.01),有顯著意義。NBP高劑量組與中、低劑量組兩兩比較白介素-1β含量均有顯著性差異((P<0.01)。
　　結(jié)論:

10、>　　1、NBP預(yù)處理組的大鼠大腦皮質(zhì)梗死區(qū),較Sham組及IR組均明顯縮小。提示丁苯酞預(yù)處理可減小腦缺血后腦梗死體積。
　　2、NBP預(yù)處理組較 IR組神經(jīng)功能缺損評分明顯減少,光鏡及電鏡下可顯示大腦皮質(zhì)神經(jīng)元破壞程度較小,保留部分線粒體,神經(jīng)元損害較輕。提示丁苯酞預(yù)處理對神經(jīng)元有預(yù)防性保護(hù)作用。
　　3、電鏡下提示,在Sham組未見白細(xì)胞浸潤,但I(xiàn)R組及NBP預(yù)處理組均明顯增多,但NBP各組的炎性細(xì)胞浸潤較IR組明顯減少