副溶血性弧菌對含氯消毒劑的耐藥響應及其耐藥機理探究.pdf

1、消毒劑的使用是當今食品工業(yè)保障食品安全的一項重要措施,尤其是含氯消毒劑,由于其廣譜、高效、低毒和成本低等特點,是水產養(yǎng)殖場地和水產品加工業(yè)中消除食品腐敗菌和病原菌的首選消毒劑之一,來自環(huán)境和食品的食源性致病菌對消毒劑的耐藥性可能對人類健康及食品工業(yè)造成重大危害。副溶血性弧菌是水產品中引起細菌性食物中毒的重要食源性致病菌,它們分布廣泛、污染率高、危害嚴重,由該菌引起的食物中毒案例在世界各地均有報道。但該菌對消毒劑的耐藥性及其耐藥機理在國內

2、外尚未見報道。本文系統(tǒng)研究了副溶血性弧菌對含氯消毒劑的耐藥響應情況并對其耐藥機理進行了探究:
　　1、副溶血性弧菌對含氯消毒劑的敏感性實驗及耐藥菌株的篩選
　　以6株副溶血性弧菌實驗室菌株 NQ-020、NQ-246、NQ-247、NQ-248、NQ-250及NQ-253為受試菌,通過氯胺-T和次氯酸鈉兩種含氯消毒劑亞致死濃度下連續(xù)性誘導,成功的篩選出了對氯胺-T具有耐藥性的NQ-020-T、NQ-246-T、NQ-247-

3、T、NQ-248-T、NQ-250-T、NQ-253-T以及對次氯酸鈉具有耐藥性的NQ-020-Na、NQ-248-Na、NQ-250-Na、NQ-253-Na10株穩(wěn)定性耐藥菌株以及 NQ-246-Na和NQ-247-Na2株不穩(wěn)定耐受菌株。在TSB、MHB和TSB-PBS三種培養(yǎng)體系中,它們對氯胺-T和次氯酸鈉的耐受性均比原始菌株增加了一倍,其最小抑菌濃度值分別從128ppm、128ppm、64ppm上升到256ppm、256ppm

4、以及128ppm。
　　2、原始、耐藥菌株培養(yǎng)特性、菌落特征、生化特性比較研究
　　將原始、耐藥菌株分別接種于胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)、硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖瓊脂(TCBS)、雙層科瑪嘉以及科瑪嘉培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),觀察其培養(yǎng)特性及菌落特征并對其進行生化鑒定分析。結果表明,耐藥菌株的培養(yǎng)特性和菌落特征與原始菌株并沒有差異,在TSA、TCBS、雙層科瑪嘉以及科瑪嘉培養(yǎng)基中均生長良好,并且都呈現(xiàn)出副溶血性弧菌的典型菌落特征。

5、然而,與原始菌株相比,耐藥菌株的生化特性卻不盡相同,通過消毒劑的誘導,菌株在組氨酸同化、氨基乙酸芳胺酶、磷酸酶、β-半乳糖苷酸酶、鳥氨酸脫羧酶、β-葡萄糖苷酶、L-蘋果酸鹽同化、L-乳酸鹽同化、賴氨酸脫羧酶、琥珀酸鹽產堿、乳酸鹽產堿、Y-谷氨酰轉移酶等方面發(fā)生了變化。
　　3、原始、耐藥菌株生長特性比較研究
　　本實驗比較研究了原始、耐藥菌株在不同NaCl濃度(1％、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%)以及不同pH值(

6、pH5.5、pH6、pH6.5、pH7、pH7.5、pH8、pH8.5、pH9)環(huán)境條件下的生長特性。研究表明,對于鹽度而言,耐藥菌株和原始菌株的生長情況并無太大差異,除NQ-250-T和 NQ-246-Na的最適鹽度從原始菌株的3%NaCl變?yōu)?%NaCl之外,其它耐藥菌株的最適鹽度與所對應的原始菌株相同。在相同pH下,耐藥菌株與它們所對應的的原始菌株的生長情況發(fā)生了改變,但其最適pH并未發(fā)生變化。
　　4、副溶血性弧菌對含氯消

7、毒劑耐藥機理探究
　　從超微結構、細胞形態(tài)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和DNA分型的生理角度探究了副溶血性弧菌對含氯消毒劑的耐藥調控機制。結果表明,與原始菌株相比,耐藥菌株的細胞形態(tài)都表現(xiàn)出了體積由大向小、形態(tài)由細長狀向短粗狀或橢圓狀變化的趨勢,并且經過含氯消毒劑誘導后,副溶血性弧菌耐藥菌株的的SOD活性均有所增加。但20.5kb~1135kb分子量 DNA的脈沖場凝膠電泳(PFGE)圖譜中并未出現(xiàn)耐藥菌株發(fā)生基因突變或超表達現(xiàn)