半花菁結(jié)構(gòu)pH熒光探針以及葉酸修飾CMD脂質(zhì)體的研究.pdf

1、小分子熒光探針擁有靈敏度高、響應(yīng)速度快、檢測(cè)簡(jiǎn)便、可實(shí)時(shí)原位檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，在細(xì)胞成像等生命研究領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。本文以小分子熒光探針為切入點(diǎn)，基于分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移(ICT)機(jī)制，構(gòu)建了一種檢測(cè)pH值的比值式熒光探針CyP。該探針以1-乙基-2，3，3-三甲基吲哚碘化物作為ICT熒光骨架，以對(duì)羥基苯甲醛作為目標(biāo)物的識(shí)別基團(tuán)。該探針在DMSO/水混合溶劑中對(duì)H+響應(yīng)具有專一性，探針的熒光發(fā)射峰強(qiáng)度比值(I513 nm/I553 nm)在pH

2、值5.4-7.2范圍具有良好的線性關(guān)系，可有效的避開(kāi)探針濃度、復(fù)雜環(huán)境因素等帶來(lái)的干擾。另外發(fā)現(xiàn)探針在工作濃度下具有較低細(xì)胞毒性，同時(shí)探針能夠在短時(shí)間內(nèi)被細(xì)胞攝取。研究結(jié)果表明CyP是一類潛在的可用于檢測(cè)分析細(xì)胞內(nèi)pH值的熒光探針。
　　脂質(zhì)體作為藥物運(yùn)輸載體，具有較好的生物相容性、被動(dòng)靶向、可保護(hù)包覆的藥物等優(yōu)點(diǎn)，但同時(shí)存在穩(wěn)定性差、無(wú)主動(dòng)靶向性、包封藥物易滲漏等不足。本課題組前期工作表明采用羧甲基葡聚糖(CMD)修飾脂質(zhì)體(C

3、MD-LIPs)，可以使脂質(zhì)體具有較好的穩(wěn)定性，并具有pH敏感釋放藥物性質(zhì)。本文延續(xù)上述工作，將對(duì)腫瘤細(xì)胞具有特異性靶向作用的葉酸偶聯(lián)到CMD-LIPs表面制備主動(dòng)靶向脂質(zhì)體，以進(jìn)一步改善脂質(zhì)體的抗腫瘤性能。首先，以葡聚糖、葉酸等為原料，合成了葉酸修飾兩親性葡聚糖(FA-CMD)，并以此為表面修飾材料，通過(guò)薄膜水化超聲法制備了FA修飾脂質(zhì)體(FA-CMD-LIPs)。該脂質(zhì)體的表面電荷約為-18mV，粒徑約200nm，4℃下可儲(chǔ)存30天

4、以上。通過(guò)硫酸銨梯度法制備了負(fù)載阿霉素(DOX)的FA-CMD-LIPs，包封率達(dá)到94％。體外藥物緩釋表明FA-CMD-LIPs對(duì)DOX的釋放速率快于CMD-LIPs，且同樣具有pH敏感性。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明，負(fù)載阿霉素的FA-CMD-LIPs對(duì)HeLa腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用要高于負(fù)載阿霉素的CMD-LIPs。此外，熒光顯微鏡顯示相比于載藥CMD-LIPs，載藥FA-CMD-LIPs體系中細(xì)胞攝取的DOX濃度較高，表明FA-CMD-LI