利用唐魚檢測奶粉中環(huán)境雌激素效應(yīng)物的方法.pdf

1、環(huán)境雌激素可以通過與雌激素受體結(jié)合誘導(dǎo)魚類肝細(xì)胞產(chǎn)生生物標(biāo)志物---卵黃蛋白原（Vitellogenin，Vtg）。本研究利用Vtg與卵黃磷脂蛋白（Lipovitellin，Lv）同免疫原性的特點，初步建立了一個用Lv抗血清檢測卵黃蛋白原的方法。
　　 將成熟雌性唐魚在4℃冰浴下取卵巢，10000rpm離心60min，上清液在4％-15％梯度Native-PAGE顯示Lv分子量為314kDa。純化Lv免疫大鼠獲得多克隆抗血清?？?/p>

2、血清與經(jīng)17β-雌二醇（E2）誘導(dǎo)的雄性唐魚、雌性唐魚以及唐魚卵巢的勻漿液能發(fā)生免疫反應(yīng)，并且印跡位置與雌性特異蛋白Vtg的位置相當(dāng)。但是抗血清和未經(jīng)E2誘導(dǎo)的雄魚整體勻漿液并無反應(yīng)，顯示Lv的抗血清與Vtg和Lv兩種蛋白是特異結(jié)合的。結(jié)果表明，唐魚Lv的抗血清可用于檢測唐魚的Vtg。
　　 Native-PAGE分析表明，在E2的誘導(dǎo)下，雄性唐魚體內(nèi)產(chǎn)生雌性特異蛋白Vtg，并且在體內(nèi)積累。利用Mg2+-EDTA選擇性沉淀和陰離

3、子交換層析的兩步純化方法可分離純化唐魚Vtg。經(jīng)Native-PAGE鑒定唐魚Vtg的分子量為440kDa。以唐魚Lv抗血清為抗體，Lv作為標(biāo)準(zhǔn)品建立間接ELISA，可用于檢測整體勻漿中Vtg的含量，檢測濃度為4-256ng/mL，Lv抗血清最佳稀釋度為1:4000，批內(nèi)誤差為2.286％，批間誤差為5.618％，靈敏度為8.775ng/mL。
　　 用不同品牌的奶粉投喂唐魚90天，用常規(guī)方法在奶粉中未能檢測出雌激素（雌二醇、雌