空腸彎曲菌流行病學及在雞肉低溫貯藏過程中失活動力學特征研究.pdf

1、空腸彎曲菌是全球范圍內(nèi)主要的細菌性腸道病原菌。近年來許多國家人空腸彎曲菌病的發(fā)生率呈指數(shù)增長趨勢，但其中的原因尚未揭示。雖然空腸彎曲菌有多種傳播途徑，但是消費雞肉被認為與人感染彎曲菌密切相關。降低雞肉中空腸彎曲菌的感染量是控制人彎曲菌病的主要途徑。此外，由于空腸彎曲菌耐藥性的不斷出現(xiàn)，食品安全和食源性疾病的問題已日益突出，成為公共衛(wèi)生關注的新焦點。本研究的目的是：(1)對醫(yī)院腹瀉人群、食品從業(yè)健康人群、農(nóng)貿(mào)市場食物、寵物群體彎曲菌的感染

2、流行狀況進行初步調查研究；(2)應用國標方法鑒定分離株的生化特性，并應用2007年美國臨床實驗室標準化研究所(CLSI)推薦使用的瓊脂擴散法進行耐藥分析；(3)對低溫貯藏過程中彎曲菌在雞肉表面的失活動力學特征進行初步研究。 一、空腸彎曲菌和結腸彎曲菌的流行病學調查 自2007年1月至2008年12月采集揚州市區(qū)2所醫(yī)院腹瀉人群的糞便樣品2，758份，揚州市疾病預防控制中心健康體檢人群的肛拭樣品2，771份，揚州市區(qū)四個主

3、要農(nóng)貿(mào)市場食品樣本1，149份，揚州和上海地區(qū)寵物門診以及飼養(yǎng)場的寵物肛拭樣品510份。以國標法為參照，采用增菌培養(yǎng)、選擇性培養(yǎng)和多重PCR鑒定方法對上述樣品進行空腸彎曲菌和結腸彎曲菌的分離鑒定。結果顯示，醫(yī)院糞便樣品中，空腸彎曲菌陽性率為4.5％(124/2，758)，結腸彎曲菌陽性率為0.4％(11/2，758)。本室4年的統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，不同醫(yī)院的感染率差異不顯著(p>0.05)，門診部的感染率極顯著高于住院部的(p<0.01)，6

4、月-10月份的感染率顯著高于11月-2月和3月-5月的感染率(p<0.05)。食品從業(yè)健康人群的樣品中，空腸彎曲菌陽性0.14％(4/2，771)。腹瀉人群感染率極顯著高于健康人群(P<0.01)。農(nóng)貿(mào)市場食品樣本中，空腸彎曲菌陽性率為1.91％(22/1，149)，結腸彎曲菌陽性率為1.22％(14/1，149)。寵物犬門診樣本中，空腸彎曲菌陽性率為5.36％(18/336)，結腸彎曲菌陽性率為1.79％(6/336)。寵物飼養(yǎng)基地以

5、及犬防樣品中，空腸彎曲菌陽性陽性率為1.75％(3/174)。從以上結果可以看出，空腸彎曲菌是引起腹瀉的重要的病原。寵物犬和食品是空腸彎曲菌感染人的重要途徑。加強對寵物源、食品源彎曲菌的控制，有助于預防和控制彎曲 二、彎曲菌分離株的耐藥性分析 采用國標方法和2007年美國臨床實驗室標準化研究所(CLSI)推薦使用的瓊脂擴散法對96株人源空腸彎曲菌、22株市場源空腸彎曲菌、15株寵物源空腸彎曲菌，以及21株結腸彎曲菌的耐藥

6、性進行了研究。 藥敏實驗結果顯示，133株空腸彎曲菌對8大類21種抗生素高度敏感的是：頭孢噻肟96.24％、慶大霉素94.74％、紅霉素92.48％、阿齊紅霉素91.73％、阿莫西林85.71％，高度耐藥的是：頭孢哌酮100％、頭孢拉定97.74％、萘啶酸90.23％、頭孢克羅90.22％、復方新諾明87.97％、環(huán)丙沙星87.22％、諾氟沙星85.71％、左旋氧氟沙星84.36％、恩諾沙星84.96％、四環(huán)素82.70％。耐藥

7、菌株的多重耐藥分布于2耐到17耐不等，主要集中在8耐到14耐，占87.22％。 21株結腸彎曲菌對臨床常用的抗生素高度敏感的是：頭孢噻肟95.24％、阿莫西林85.72％、紅霉素85.72％、阿齊紅霉素90.48％、克林霉素80.95％;高度耐藥的是：頭孢拉定100％、恩諾沙星100％、頭孢哌酮100％、左旋氧氟沙星100％，萘定酮酸100％、復方新諾明100％、強力霉素100％、環(huán)丙沙星95.24％、四環(huán)素95.24％、頭孢克

8、羅95.24％、諾氟沙星90.48％、土霉素85.72％、青霉素80.95％。其中多重耐藥菌株主要分布在11耐、14耐和17耐。 藥敏實驗結果表明，133株不同來源的空腸彎曲菌只對氨基糖甙類和大環(huán)內(nèi)脂類抗生素較為敏感，對喹諾酮類、磺胺類、四環(huán)素類和大多數(shù)頭孢菌素類抗生素均產(chǎn)生了不同程度的耐藥性。不同來源空腸彎曲菌的多重耐藥的現(xiàn)象十分嚴重，耐藥譜也較寬，其中市場來源的菌株耐藥譜最寬。而人源菌株與寵物犬菌株的耐藥譜較為接近，這可能與

9、兩者接觸更為頻繁有關。必須加強各地彎曲菌耐藥性和抗生素使用情況的監(jiān)測，及時調整用藥方案和公共衛(wèi)生策略。 三、空腸彎曲菌在雞肉低溫貯藏過程中的失活動力學特征 空腸彎曲菌對低溫較為敏感，低溫貯藏是降低雞肉表面彎曲菌數(shù)量較為有效的措施之一。為了了解空腸彎曲菌在雞肉低溫貯藏過程中的失活動力學特征，并為雞肉產(chǎn)品中彎曲菌的風險評估提供有力數(shù)據(jù)。為此研究了-20℃、4℃低溫貯藏溫度條件下三株空腸彎曲菌(ATCC33560，JR0706

10、-2，ALM-80)在雞肉表面的失活動力學特征。結果表明：-20℃溫度條件下在55d貯藏期內(nèi)雞肉樣品中3株空腸彎曲菌的殘活細胞數(shù)分別降低了3.16，2.87，3.14 logCFU/g。殘活率在冷凍起始20d內(nèi)，呈現(xiàn)緩慢下降趨勢；20d至45d的下降速度較快；接著在45天至55天的下降速度放緩。4℃溫度條件下在10d貯藏期內(nèi)雞肉樣品中3株空腸彎曲菌的殘活細胞數(shù)分別降低了3.47，3.35，3.51logCFU/g。平均失活率分別為0.3

11、471gCFU/d，0.355lgCFU/d，0.439LgCFU/d。不同的空腸彎曲菌菌株在-20℃和4℃低溫貯藏過程中殘活率的對數(shù)值下降幅度存在差別，但三株細菌之間殘活率變化趨勢沒有顯著區(qū)別(P>0.05)。應用軟件對所得數(shù)據(jù)進行擬合，結果表明所得到的失活動力學方程與實際觀測值吻合度較高。 冷鏈在雞肉產(chǎn)品的銷售過程中起到至關重要的作用，然而在實際生產(chǎn)生活中雞肉產(chǎn)品往往會有一段時間處在冷鏈系統(tǒng)之外，存在反復凍融的情況。為了研究

12、反復凍融對雞肉表面彎曲菌的活力的影響，我們進行了8次凍融實驗，結果表明：空腸彎曲的殘活細胞數(shù)降低了2.758 logCFU/g。細菌的殘活曲線呈現(xiàn)先快后慢的下降趨勢。第1到5次的凍融操作過程中，平均失活率為0.43210gCFU/次。第6到8次凍融過程中平均失活率為0.07logCFU/次。說明反復凍融的操作可以起到降低雞肉表面空腸彎曲菌數(shù)量的效果。 為了研究在冷鏈系統(tǒng)之外雞肉表面空腸彎曲菌的數(shù)量變化，在凍融試驗中預設了三個“事

13、故點”，模擬冷鏈失效3，6，12小時后雞肉表面空腸彎曲菌數(shù)量在不同外界溫度環(huán)境下的變化規(guī)律。在前兩個“事故點”(第一、二次凍融實驗)O℃和25℃環(huán)境溫度下，雞肉表面空腸彎曲菌存活細胞數(shù)沒有顯著的變化：37℃環(huán)境溫度下，細菌呈現(xiàn)緩慢增殖。在第三個“事故點”(第三次凍融實驗)0℃和25℃環(huán)境溫度下，雞肉表面空腸彎曲菌存活細胞數(shù)呈現(xiàn)下降趨勢，而37℃環(huán)境溫度下，細菌數(shù)量保持穩(wěn)定。說明冷鏈是防止雞肉表面彎曲菌增殖較為行之有效的方法。 把