紅發(fā)夫酵母GGPP合成酶過量表達(dá)對(duì)蝦青素產(chǎn)量的影響.pdf

1、紅發(fā)夫酵母GGPP合成酶過量表達(dá)對(duì)蝦青素產(chǎn)量的影響TheeffectofastaxanthinyieldbyoVerexpressingGGPPsynthaseinPhaffiayeast_學(xué)科專業(yè)：制藥工程研究生：宋熙指導(dǎo)教師：趙學(xué)明教授天津大學(xué)化工學(xué)院二零一零年六月一苓一夸，牛八月r、、V摘要蝦青素是一種類胡蘿卜素，具有極強(qiáng)的淬滅自由基的能力并且還具有極強(qiáng)的著色能力，因此在醫(yī)藥，化妝品，食品及飼料行業(yè)都有廣泛的應(yīng)用前景。紅發(fā)夫酵母的

2、發(fā)酵生產(chǎn)蝦青素，以培養(yǎng)時(shí)間短，不需光照而且可以進(jìn)行高密度培養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn)得到廣泛關(guān)注。代謝工程方法改造菌種常用手段為敲除某些旁路的關(guān)鍵酶基因以減少碳的代謝分流，或者過表達(dá)某些關(guān)鍵酶基因。本文以野生型紅法夫酵母As21557作為出發(fā)菌株，確定應(yīng)該在上游基因編碼的關(guān)鍵酶上入手，通過crtE基因的擴(kuò)增，增加蝦青素的前體物，進(jìn)而考查其對(duì)紅發(fā)夫酵母的生長(zhǎng)及蝦青素的產(chǎn)量帶來的影響。crtE基因編碼櫳牛兒基櫳牛兒基焦磷酸合成酶(GGPP)，GGPP是多種初

3、生和次生代謝物的共同前體，為許多二萜、類胡蘿卜素、葉綠素、醌和維生素E側(cè)鏈等提供構(gòu)建骨架。所以GGPP合酶能夠起到調(diào)節(jié)碳流的作用，從而成為初生和次生代謝途徑中的關(guān)鍵酶之一。本實(shí)驗(yàn)通過同源重組的方法，構(gòu)建了兩個(gè)轉(zhuǎn)化載體pSXpc，pSXgc。這兩個(gè)載體均以rDNA為同源臂，分別將自帶啟動(dòng)子的crtE基因，以及替換了強(qiáng)啟動(dòng)子gpd的crtE基因轉(zhuǎn)化進(jìn)紅發(fā)夫酵母，并整合至其基因組上，以G418作為抗性篩選標(biāo)記，最終篩選出成功擴(kuò)增crtE基因的