葡萄白藜蘆醇合成酶基因的克隆及其在畢赤酵母中的表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、白藜蘆醇(resveratrol,簡(jiǎn)稱Res),是一種次生代謝產(chǎn)物,植物內(nèi)毒素,具有抗氧化、抗腫瘤、抗血小板凝聚、防止人體低密度脂蛋白(LDP)氧化、提高肌體免疫力等功效Res廣泛存在于種子植物中,但是Res在植物體內(nèi)的含量是非常低的,所以僅僅用傳統(tǒng)的提取方法得到高豐度的Res非常困難,并且耗資過(guò)大.有關(guān)研究表明影響Res含量的主要因素是白藜蘆醇合成酶(resveratrolsynthase,簡(jiǎn)稱RS)的量,該研究試圖通過(guò)基因工程的方法

2、建立一種新的Res生產(chǎn)體系--畢赤酵母表達(dá)體系.為了構(gòu)建白藜蘆醇合成酶(RS)基因的克隆載體,用PCR技術(shù)從葡萄葉片總DNA中擴(kuò)增出RS基因全長(zhǎng),然后將其重組到克隆載體中.通過(guò)酶切對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行了鑒定和測(cè)序,結(jié)果表明,RS基因已經(jīng)正確克隆至pUCl9中,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌里,使RS基因能夠在大腸桿菌里保存并且大量擴(kuò)增,為RS基因構(gòu)建表達(dá)載體表達(dá)白藜蘆醇合成酶奠定了基礎(chǔ).將重組后得到的克隆載體用加Kozak序列的引物擴(kuò)增,凝膠電泳后回

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