酸性植酸酶基因的克隆及其在大腸桿菌和畢赤酵母中的表達.pdf

1、植酸酶是一種新型的可作為動物飼料添加劑的重要酶制劑,是一種能水解植酸的磷酸酶類.在動物飼料中富含磷的谷物、豆類和油料等作物中,磷的基本貯存形式是植酸磷,因單胃動物體內(nèi)缺少能分解植酸的酶很難利用這些植酸中的磷,其利用率極低.植酸酶對提高飼料中磷的利用率以及減輕因動物高磷糞便所導致的環(huán)境污染有很大的作用.植酸酶主要來自于植物和微生物,來源于植物的植酸酶均屬于6-植酸酶,最適pH范圍在5.0-7.5,不適合在單胃動物中起作用的,而且在植物中含

2、量極低,因此植酸酶的研究方向轉(zhuǎn)向最適pH值為酸性、酶含量較高的絲狀真菌.該實驗成功從絲狀真菌中提取出總DNA,通過PCR擴增,將此酸性植酸酶全基因通過pPIC9K vector轉(zhuǎn)化酵母細胞,提取酵母轉(zhuǎn)化子基因組進行PCR驗證,結(jié)果表明外源基因整合到了酵母的染色體上.提取未降解的、不含DNA與其他雜質(zhì)的RNA是進行分子克隆和基因表達分析等研究的基礎(chǔ).由于復雜的細胞壁和內(nèi)源酶活性的存在,所以要從絲狀真菌中提取和純化出有生物活性的RNA比較困

3、難.為獲得高質(zhì)量的RNA,該實驗比較了TRIZOL提總RNA、異硫氰酸胍法提取菌株總RNA、熱硼酸法提取菌株總RNA三種不同的提取方法,得出熱硼酸法適合于富含Rnase和多糖的絲狀真菌的RNA的提取,該方法可得到完整、均一的RNA樣品,并且得到的RNA可用于RT-PCR等分子生物學實驗操作.該實驗以絲狀真菌黑曲霉的總cDNA為模板,通過PCR方法擴增到理想大小的DNA片段,分別將其與質(zhì)粒pBV220連接,將正確構(gòu)建的重組質(zhì)粒pBV220