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1、湖北大學(xué)碩士學(xué)位論文枯草芽孢桿菌果膠裂解酶基因在大腸桿菌和畢赤酵母中的表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)的研究姓名：姚佳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：張桂敏20100601AbstractPectinasecatalyzethehydrolyzationofthePolygalacturOnicacidbackbonetoproduceoligosaccharidesTheyhaveshowngreatlypotentialapplicatio
2、ninthetextileindustrypaperpulp，animalfeed，productionoffruitwineandjuice，etcHowever，whenpectinaseappliedinindustry，pectinasewithexcellentcharactersarefavorableMoreoverdifferentkindsofpectinasearerequiredindifferentapplied
3、fieldsSo，itisimportanttoexploitnewpectinaseandconstructengineeredstrainwithhighyieldpectinasehaveimportantsignificancesInthisstudyanalkalinepectatelyasegenewasclonedfromBacilluss“6聒f括andexpressedinEscherichiacoliandP／ch／
4、apastorisTheseresultsareasfollows：1MolecularcloningandheterologousexpressionofallalkalinepectatelyasegenefromBacillussubtilis168inEscherich腸coliApectatelyase(PL)encodinggenewasclonedfromBacillussubtilisstr168Thegenewasam
5、plifiedbyPCRandexpressedinEscherichiacolicellswiththevectorpET23aTherecombinantEcoilwasgrownbyshakeflaskat37。Cwhentheabsorbancevalueis06，the02mMIPTGwereaddedThecellwaslysisbyultrasoninationTherecombinantenzymewaspurified
6、byNiNTAagaroseSDS—PAGEanalysisshowedthatthemolecularweightofexpressedrecombinantPLwasabout46x103whichwasthesameasthecalculatedmolecularweightItwasoptimallyactiveatpH94and550Cover5minCa’2isnotnecessarybutitCanimprovestron
7、glyenzymaticactivityItwasalsoobservedthatPELkeptover80％ofitsinitialactivityaftera30一minpreincubationat60。C2MolecularcloningandheterologousexpressionofanalkalinepectatelyasegenefromBacillussubtilis168inPichiapastorisThege
8、newasexpressedinPichiapastoriswiththevectorpHBM905a，recombiantPELcouldkeep75％residualactivityat65℃after30minpreincubation，whichismorestablethanthePELthatwasexpressedinEscheriacoliKeywords：Pectinase；Bacillussubtilis；Esche
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