枯草芽孢桿菌纖維素酶產(chǎn)酶條件及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、以實(shí)驗(yàn)室自行篩選的一株產(chǎn)纖維素酶枯草芽孢桿菌C-36為研究對(duì)象，從碳源、氮源、接種量、培養(yǎng)基初始pH值、溫度、培養(yǎng)時(shí)間幾方面研究該菌株的產(chǎn)酶條件，結(jié)果表明該菌產(chǎn)酶的最適碳源為2％的CMC-Na，最適氮源為2.5％的蛋白胨+酵母粉復(fù)合氮源，最佳接種量為4％，培養(yǎng)基最適起始pH為pH5.0，產(chǎn)酶最適溫度為37℃，最佳培養(yǎng)時(shí)間為36h。再以碳源濃度、氮源濃度、接種量、培養(yǎng)基初始pH值、培養(yǎng)時(shí)間五個(gè)試驗(yàn)因素，按正交表L16(45)設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，

2、確定枯草芽孢桿菌C-36產(chǎn)酶的最佳優(yōu)化組合條件。結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌C-36產(chǎn)酶最佳組合條件為：培養(yǎng)基起始pH值為pH5.0，碳源為2％的CMC-Na，氮源為3.5％的蛋白胨+酵母粉，按2％的接種量，培養(yǎng)時(shí)間為36h。在此條件下，37℃培養(yǎng)，CMC酶活可達(dá)223.23U/ml，是優(yōu)化前的3.5倍。 按優(yōu)化培養(yǎng)條件，對(duì)枯草芽孢桿菌C-36進(jìn)行產(chǎn)酶培養(yǎng)，得到粗酶液。粗酶液經(jīng)硫酸銨、SephadexG-75、Sephadex6-10

3、0分離純化后，得到一個(gè)電泳純的纖維素酶，酶純化倍數(shù)為10.42倍，回收率為21.26％。SDS-PAGE結(jié)果表明，該酶分子量為35kD。 對(duì)枯草芽孢桿菌C-36纖維素酶進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定，結(jié)果表明，該酶最適反應(yīng)溫度為65℃；最適反應(yīng)pH值為pH6.8，在pH3.5～pH9.5范圍內(nèi)酶活較穩(wěn)定；Zn2+、Pb2+、Fe3+對(duì)酶有抑制作用，Ba2+、Fe2+對(duì)酶有激活作用；在50℃，pH6.8條件下，酶對(duì)CMC-Na的米氏常數(shù)Km為0