枯草芽孢桿菌WN02芽孢漆酶的性質及染料脫色研究.pdf

1、本文利用含銅的富集培養(yǎng)基,從污水處理廠二沉池的活性污泥中分離得到了一株編號為WN02的細菌。通過在菌落中央及邊緣滴加漆酶底物觀察顯色,表明該菌株具有丁香醛連氮(SGZ)、2,2'-連氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)和2,6-二甲氧基苯酚(DMP)氧化活性。結合形態(tài)學觀察、生理生化反應以及16S rDNA序列分析結果,鑒定WN02菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。通過對其進行生物學特性初步研究,確定

2、其最適生長溫度為30℃,最適生長pH為6.0。
　　 利用ABTS、SGZ和DMP三種底物測定WN02漆酶酶活性,結果顯示催化反應最適pH有所不同,分別為:3.0、7.0和8.6,表明WN02漆酶對底物作用的pH范圍廣泛。此外WN02芽孢漆酶在不同pH條件下表現出了較好的穩(wěn)定性,在堿性范圍尤為突出。WN02漆酶最適反應溫度為60℃,在40-80℃范圍均體現了較高活性,甚至在100℃條件下,酶活仍可保持20％以上。WN02漆酶在最

3、適溫度下可保持活性超過24h。幾種漆酶抑制劑中,0.1 mmol/L的半胱氨酸和二硫蘇糖醇抑制作用明顯,同樣濃度的NaN3和SDS卻對酶活具有促進作用,EDTA對酶活的抑制作用較低。隨有機溶劑濃度升高WN02漆酶活性逐漸下降,1％的Tween80與Triton X-100具有明顯的抑制效果。Ba2+、Co2+、Na+存在時WN02漆酶酶活性顯著提高,Hg2+、Ag+、Mn2+對其抑制效果明顯,Al3+和Fe3+則顯示出較小的抑制作用。<

4、br>　　 WN02漆酶可在無介體存在時對四種不同類型的染料脫色:結晶紫、靛紅和RB亮藍(RBBR)在6 h后的脫色率分別為81.47％、72.85％和26.69％,活性黑的脫色效果較差,脫色率不足10％。測試了7種不同介體對染料脫色的影響,結果表明:各種介體對結晶紫脫色效果影響不顯著,與無介體存在時差別不大,介體ABTS、乙酰丁香酮、10-(3-二甲氨基丙)吩嗪或丁香醛加快漆酶對靛紅的脫色,2 h脫色率超過90％。較難脫色的RBBR