枯草芽孢桿菌氨肽酶的研究.pdf

1、蛋白質(zhì)經(jīng)過水解可產(chǎn)生多肽類物質(zhì)和少量氨基酸，明顯改善了其溶解性、熱穩(wěn)定性以及營養(yǎng)特性，有利于人體的吸收和利用。如果水解條件適宜，還會(huì)產(chǎn)生具有某些特殊功能的生物活性肽，但是由于水解將包裹在內(nèi)的疏水性氨基酸殘基暴露出來了，其水解液往往會(huì)呈現(xiàn)苦味，極大的限制其應(yīng)用。氨肽酶是一種可從氨基端切除苦味肽上的疏水氨基酸的端肽酶，因而具有脫苦的功能。本論文主要研究了氨肽酶的搖瓶產(chǎn)酶發(fā)酵條件、小型發(fā)酵罐上的發(fā)酵條件、初步探索了可放大的提取工藝以及其與堿性

2、蛋白酶水解大豆分離蛋白在抗氧化方面的應(yīng)用。
　　 通過優(yōu)化后得到搖瓶的最佳發(fā)酵條件為:玉米粉30 g/L，豆渣粉10 g/L，K2HPO43 g/L，MgSO4·7H2O0.6 g/L，CoCl20.2mmol/L，起始pH7.5，接種量4%，裝液量50mL/250mL，轉(zhuǎn)速200r/min，溫度38℃，培養(yǎng)時(shí)間26h。優(yōu)化后的酶活可達(dá)3000U/mL。通過優(yōu)化單位體積的酶活有了較大的提高，同時(shí)原料也有較大的減少，搖瓶的裝液量也

3、增大了。
　　 在7L發(fā)酵罐上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，初步摸索出了發(fā)酵罐條件:全自動(dòng)式7L發(fā)酵罐(Bioflo110，美國NBS公司)中裝液量為4.5L，發(fā)酵溫度38℃，接種量為4%(V/V)，攪拌轉(zhuǎn)速為300～800rpm，通氣比為1.5:1，溶氧和攪拌轉(zhuǎn)速相偶聯(lián)，最低溶氧設(shè)為60%。通過采取控制溶氧、補(bǔ)料和原料的預(yù)處理等策略，酶活有了進(jìn)一步的提高，最大酶活可達(dá)到3900 U/mL。
　　 發(fā)酵液經(jīng)過離心后，采用體積分?jǐn)?shù)為50%乙醇

4、沉淀，酶的回收率約為80%；而采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%(NH4)2SO4鹽析沉淀時(shí)，酶的回收率可達(dá)90%。從將來的放大生產(chǎn)和提取的角度考慮，為節(jié)省乙醇和(NH4)2SO4的用量，初步探索了一套提取工藝:發(fā)酵液采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的(NH4)2SO4澄清，再經(jīng)30kDa的超濾膜濃縮2.5倍時(shí)，純化倍數(shù)為6.1，酶的回收率為87.7%。超濾后的保留液再經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%的(NH4)2SO4鹽析，可沉淀出保留液中90%的酶。按此工藝超濾濃縮后的液