枯草桿菌Zj016發(fā)酵產(chǎn)氨肽酶的研究.pdf

1、外切型氨肽酶在蛋白水解產(chǎn)品的制備中可作為組合復(fù)配用酶,起脫苦、提高蛋白質(zhì)利用率等作用,還有作為N端測序工具酶和醫(yī)療診斷用酶的應(yīng)用前景。
　　 枯草芽孢桿菌Zj016在搖瓶中適宜的發(fā)酵產(chǎn)氨肽酶條件為:豆粉渣12g/L,玉米粉30g/L,CoCl20.2mmol/L,MgSO4·7H2O0.6g/L,K2HPO43g/L,初始pH8.0,發(fā)酵溫度38℃,接種量4％,往復(fù)式搖床210r/min,發(fā)酵時(shí)間26h后,酶活為5500U/mL

2、。
　　 在15升發(fā)酵罐上適宜的發(fā)酵條件為:發(fā)酵罐(B.Braun Biotech international)中裝液量為8L,發(fā)酵溫度38℃,接種量為4％(V/V),攪拌轉(zhuǎn)速為300-500r/min,通氣量為1∶0.7,溶氧控制在50％左右,溶氧和攪拌轉(zhuǎn)速偶聯(lián),原料預(yù)處理后,培養(yǎng)基中初始糖在8-10g/L時(shí)產(chǎn)酶較高。發(fā)酵過程中通過中間分批補(bǔ)料,分別在培養(yǎng)7小時(shí),14小時(shí)補(bǔ)料,發(fā)酵液中的酶活達(dá)4000U/mL。
　　

3、建立了一種液體氨肽酶提取工藝:發(fā)酵液,經(jīng)離心、澄清、超濾濃縮、脫鹽、醇沉后溶解獲得液體氨肽酶,澄清酶活收率90％、超濾濃縮酶活收率91％、脫鹽回收率78％、醇沉酶活收率85％,總回收率為55％,液體酶在pH6.0時(shí)一個(gè)月后,酶活保存率85％以上。
　　 以枯草芽孢桿菌Zj016為出發(fā)菌株,經(jīng)低能氮離子注入后,篩選得到一株遺傳性能穩(wěn)定產(chǎn)酶高的突變菌株N80-25,其產(chǎn)酶能力與原始菌Zj016相比,提高了1.2倍。
　　 氨

4、肽酶與中性蛋白酶組合水解大豆分離蛋白,底物濃度6％,中性蛋白酶加量為E/S=5×104U/g,氨肽酶加量E/S=8.0×105 U/g,pH8.5,溫度50℃,水解4h后,水解液中總游離氨基酸含量為13.6mg/mL,其中Leu含量相對最高,占總游離氨基酸的14.9％,其次分別是Ala14.5％、Arg11.5％、Glu9.6％、Va18.03％、Ile7.93％。雙酶水解液中游離氨基酸的含量是ProteAXG酶水解液中游離氨基酸含量的