蘋果中抗氧化黃酮結(jié)構(gòu)和功能研究.pdf

1、本文對(duì)蘋果中的黃酮進(jìn)行提取工藝、分離純化工藝、黃酮結(jié)構(gòu)及抗油脂氧化方面的研究，與傳統(tǒng)的油脂抗氧化劑 BHT及黃酮代表物質(zhì)蘆丁抗油脂氧化能力做比較，為找到新型抗油脂氧化劑及提高蘋果附加價(jià)值提供理論基礎(chǔ)。
　　蘋果果實(shí)中富含多酚類物質(zhì)，在細(xì)胞遭到破壞后，多酚氧化酶會(huì)迅速破壞蘋果中具有生理功能的黃酮類物質(zhì)，因此在原料預(yù)處理中，采用100℃短時(shí)加熱法破壞多酚氧化酶以保護(hù)黃酮類物質(zhì)。對(duì)原料進(jìn)行預(yù)處理后，運(yùn)用單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)確定有機(jī)溶劑熱

2、浸法提取黃酮類化合物的工藝，提取溫度為70℃，提取時(shí)間為1h，乙醇濃度為75％，料液比為1:10，每份樣品處理兩次，收集提取液，對(duì)提取液進(jìn)行蒸發(fā)濃縮醇沉處理，得黃酮浸膏。
　　利用靜態(tài)吸附與解析法，通過朗格繆爾方程對(duì)大孔樹脂進(jìn)行篩選，最終選用大孔吸附樹脂 AB-8進(jìn)行蘋果黃酮的分離純化。進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)及二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)與優(yōu)化大孔樹脂 AB-8分離純化蘋果黃酮工藝：每次上樣量為250mL上樣液中黃酮含量200.00mg，洗脫劑乙

3、醇濃度選擇80%，上樣液流速1.5mL/min，洗脫液流速為1.8mL/min，上樣液濃度為0.82mg/mL，樹脂每使用2個(gè)周期做一次再生，黃酮得率平均為84.03%，收集流出液，濃縮干燥，得粗制黃酮，測(cè)其純度由31.87%提升至93.29%，純度測(cè)定采用鋁鹽絡(luò)合顯色法，在后續(xù)研究中發(fā)現(xiàn)有其他雜質(zhì)干擾其純度測(cè)定。
　　粗制黃酮為混合化合物，利用葡聚糖凝膠柱Sephadex LH-20進(jìn)行進(jìn)一步單體分離，分離純化工藝為將1mL粗制

4、黃酮溶液加入凝膠柱，以0.8mL/min的流速進(jìn)行梯度洗脫，洗脫劑為甲醇溶液，在完成梯度洗脫后用純甲醇進(jìn)行洗脫至HPLC檢測(cè)為直線時(shí)停止。結(jié)合HPLC對(duì)洗脫液的檢測(cè)，可以成功得到一個(gè)黃酮單體，采用高效液相色譜法檢測(cè)黃酮單體的純度為83.579%。
　　得到蘋果黃酮單體后，進(jìn)行結(jié)構(gòu)與抗油脂氧化功能研究。黃酮類化合物含有特殊的功能基團(tuán)，可與氧化或者還原能力不同的化合物發(fā)生反應(yīng)，引起顏色變化。根據(jù)顏色變化可推測(cè)黃酮單體為黃酮醇類化合物。

5、利用黃酮的特征紫外光譜，加入位移劑觀察紫外光譜的位移變化，推測(cè)黃酮取代基的情況，確定在黃酮母核的3位置上有羥基取代，圍繞4′和7位置有鄰二酚羥基。
　　采用烘箱法檢測(cè)蘋果黃酮單體化合物、蘆丁、BHT的抗油脂氧化能力，抗氧化效果 BHT>蘋果黃酮單體化合物>蘆丁。從結(jié)構(gòu)上分析蘋果黃酮單體僅就 A環(huán)的抗氧化能力高于蘆丁；同時(shí)C環(huán)蘆丁的3-OH被蕓香糖取代，蘋果黃酮單體擁有3-OH，可聯(lián)合4位羧基與金屬離子形成穩(wěn)定的螯合物，延長(zhǎng)油脂自動(dòng)