云南高寒山區(qū)苦蕎黃酮抗氧化和降血糖活性研究.pdf

1、苦蕎營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，籽粒中含有蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)和氨基酸等營(yíng)養(yǎng)成分，且富含黃酮類化合物。為了更加準(zhǔn)確、科學(xué)的評(píng)價(jià)苦蕎黃酮的抗氧化和降血糖活性，本研究首先構(gòu)建體外模擬消化模型，研究體外消化對(duì)苦蕎黃酮組成及含量的影響，評(píng)價(jià)其體外抗氧化和降血糖活性;進(jìn)一步構(gòu)建肝臟細(xì)胞模型，在細(xì)胞水平研究苦蕎黃酮的自由基清除能力和降血糖能力;最后采用db/db糖尿病小鼠模型，在動(dòng)物水平研究苦蕎黃酮的抗氧化能力和降血糖功效。主要結(jié)果如下:
　　(1)苦蕎品

2、種篩選和提取工藝優(yōu)化
　　通過測(cè)定云南、山東、山西、貴州和陜西五個(gè)省份的苦蕎品種中黃酮類物質(zhì)的含量，發(fā)現(xiàn)云南高寒山區(qū)苦蕎的黃酮含量最高，其主要黃酮類物質(zhì)為蘆丁和槲皮苷，含量分別為1.76％和0.17％。根據(jù)單因素結(jié)果選取乙醇體積分?jǐn)?shù)(40％、50％、60％)，料液比（1∶20、1∶25、1∶30 g/mL），溫度(60℃、70℃、80℃)，提取時(shí)間(50 min、60min、70 min)4個(gè)因素進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化，得到苦蕎黃酮最佳提

3、取條件為:乙醇體積分?jǐn)?shù)54％;料液比1∶24g/mL;提取時(shí)間62 min;提取溫度71℃。在此最佳提取條件下，理論黃酮得率為2.21％。以響應(yīng)面優(yōu)化所得的最優(yōu)提取條件進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，苦蕎黃酮的實(shí)際得率為2.20％，與理論得率相比，相對(duì)誤差為0.45％。因此采用響應(yīng)面法優(yōu)化得到的苦蕎黃酮提取條件參數(shù)準(zhǔn)確可靠，具有實(shí)用價(jià)值。
　　(2)體外模擬消化對(duì)苦蕎黃酮抗氧化和降血糖活性的影響
　　經(jīng)模擬胃腸消化后，苦蕎黃酮含量略有降低

4、?？寡趸钚詫?shí)驗(yàn)表明，苦蕎黃酮消化前清除ABTS和DPPH自由基的IC50分別是0.81 mg/mL和0.18 mg/mL，消化后的IC50分別是1.30 mg/mL和0.61 mg/mL;采用FRAP法測(cè)定的苦蕎黃酮消化前抗氧化能力為19.37mg Vc/g，消化后為7.00 mg Vc/g，綜合以上三種評(píng)價(jià)方法，苦蕎黃酮消化前后均具有較好的體外抗氧化能力。淀粉等碳水化合物被攝入后，經(jīng)一系列消化，最終通過α-葡萄糖苷酶水解生成葡萄糖，

5、因此抑制α-葡萄糖苷酶活性，可以減緩餐后血糖的上升。α-葡萄糖苷酶活性試驗(yàn)表明，與陽(yáng)性對(duì)照阿卡波糖相比（IC50，0.25 mg/mL），苦蕎黃酮消化前（IC50，0.31 mg/mL）和消化后（IC50，0.42 mg/mL）具有較好的酶活性抑制能力?？嗍w黃酮因其來源于食物，具有開發(fā)成天然α-葡萄糖苷酶抑制劑的潛力。
　　在細(xì)胞水平的研究發(fā)現(xiàn)，苦蕎黃酮和苦蕎黃酮消化物，可以顯著降低由H2O2誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS。與對(duì)照組相比，H2O

6、2組熒光強(qiáng)度增加到202％，苦蕎黃酮及其消化物(100μg/mL)分別可以顯著降低熒光強(qiáng)度到134％和129％，表明苦蕎黃酮可以有效抑制細(xì)胞內(nèi)氧自由基爆發(fā)。此外，苦蕎黃酮可以提高肝臟細(xì)胞的葡萄糖消耗能力，與對(duì)照組相比，苦蕎黃酮（10μg/mL）和苦蕎黃酮消化物(10μg/mL)分別顯著提高細(xì)胞45.43％和58.36％的葡萄糖消耗量。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，苦蕎黃酮顯著促進(jìn)細(xì)胞糖原的合成，與對(duì)照組相比，苦蕎黃酮（10μg/mL）及其消化物(10

7、μg/mL)顯著提高173％和190％的糖原合成量。因此，苦蕎黃酮可能通過促進(jìn)肝臟細(xì)胞糖原的合成從而提升細(xì)胞對(duì)葡萄糖的消耗能力。
　　(3)苦蕎黃酮db/db小鼠降血糖動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
　　采用db/db糖尿病小鼠模型研究苦蕎黃酮的抗氧化活性和降血糖功效。正常對(duì)照組小鼠(db/m)血糖為7.5 mmol/L，糖尿病模型組(db/db)為21.2 mmol/L?？嗍w黃酮可以顯著降低db/db小鼠血糖濃度，苦蕎黃酮低劑量組（200mg/

8、kg/天）血糖降低到18.8mmol/L;高劑量組（400mg/kg/天）血糖降到15.3 mmol/L?？嗍w黃酮對(duì)db/db小鼠的糖耐量和胰島素耐量也有顯著改善。此外苦蕎黃酮顯著降低db/db小鼠血清中與肝功能相關(guān)的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和堿性磷酸酶(ALP)指標(biāo)，與血脂相關(guān)的總甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)指標(biāo)，肝臟組織中TC、TG和丙二醛(MDA)含量，提高肝臟組織的總抗氧