重組苛求芽孢桿菌尿酸酶診斷性能評(píng)估.pdf

1、用尿酸酶法測(cè)定血清中尿酸水平可分為間接尿酸酶法和直接尿酸酶法,間接尿酸酶法中,用尿酸酶偶聯(lián)上醛脫氫酶和過氧化物酶的動(dòng)力學(xué)方法效率高,缺點(diǎn)是成本高,干擾因素較多,使其很難在臨床上應(yīng)用推廣。目前的直接尿酸酶法只有終點(diǎn)平衡法,受0.40 mmol/L以上血清黃嘌呤等少數(shù)物質(zhì)干擾,對(duì)大多數(shù)其余血清成分有抗性,曾是IFCC推薦的參考方法。用過氧化物酶偶聯(lián)尿酸酶再加上不同的顯色劑稱為間接終點(diǎn)平衡法,則因?yàn)橹貜?fù)性好,操作簡(jiǎn)便,節(jié)約成本等特點(diǎn)在臨床上得

2、到了廣泛地應(yīng)用,但最大的干擾因素來自于血清中的黃嘌呤。
　　我們已克隆了苛求芽孢桿菌胞內(nèi)尿酸酶基因并已申請(qǐng)其發(fā)明專利(專利受理號(hào)200910103741.1),此酶用于直接動(dòng)力學(xué)法尿酸測(cè)定時(shí)可對(duì)1.50 mmol/L黃嘌呤有抗性。本課題的研究目的是考察此尿酸酶在間接終點(diǎn)平衡法應(yīng)用中的最適條件,對(duì)其診斷性能進(jìn)行詳細(xì)地評(píng)價(jià),建立尿酸試劑盒的初步模型。
　　優(yōu)化后的試劑最適條件如下:
　　R1兩份(PBS6.0) R2一份(

3、PH9.2硼砂) HRP2.7U/ml(1.8U/ml) uricase1.2U/ml(0.4U/ml)4-AAP0.45mmol/L(0.3mmol/L) Toos4.2mmol/L(1.4mmol/L) NaN30.05％NaN30.05%
　　按照NCCLS的相關(guān)要求,對(duì)自主研制的尿酸試劑的各個(gè)診斷性能進(jìn)行了詳細(xì)地評(píng)價(jià):檢測(cè)限LOD=LOB+1.65SD=14.4umol/L;線性范圍:0-1600umol/L線性方程:Y=

4、0.0003X-0.0012, R2=0.9971;可報(bào)告范圍:14.4-3510umol/L;批內(nèi)精密度為2.2%和3.0%,批間精密度為4.0%和4.8%;試劑保存的穩(wěn)定性可達(dá)半年以上,參考區(qū)間:男206-426umol/L,女145-336umol/L;膽紅素濃度≤320umol/L,抗壞血酸濃度≤0.4mmol/L,血紅蛋白濃度≤4g/L時(shí),對(duì)尿酸測(cè)定結(jié)果沒有明顯干擾;與中生北控尿酸試劑進(jìn)行方法學(xué)比較:直線方程y=0.9506X

5、-1.2647,R2=0.9956。
　　在抗黃嘌呤干擾方面:中生北控尿酸試劑盒、成都邁克尿酸試劑盒、新城生物尿酸試劑盒、自制尿酸試劑盒在黃嘌呤濃度為0-1.2mmol/L時(shí)測(cè)定結(jié)果都沒有明顯干擾。而真核尿酸試劑在黃嘌呤濃度>0.3mmol/L時(shí),即對(duì)測(cè)定結(jié)果有明顯的負(fù)干擾。以上實(shí)驗(yàn)證明實(shí)驗(yàn)室自制原核表達(dá)的尿酸酶試劑比真核表達(dá)的尿酸酶在抗黃嘌呤方面有明顯的優(yōu)勢(shì),其它性能指標(biāo)的評(píng)價(jià)也達(dá)到了市場(chǎng)同類產(chǎn)品的相同水平。為后續(xù)將此重組尿酸酶