緩沖液種類對尿酸酶脂質體影響的初步研究.pdf

1、尿酸酶(Uricase，URI)是生物體內嘌呤降解途徑的重要酶。在人體內，若因嘌呤代謝紊亂或尿酸排泄過程受阻，則會引起血液中尿酸的濃度顯著升高，形成高尿酸血癥，繼而引發(fā)痛風綜合征等一系列疾病。URI能降低血液中尿酸的濃度，故可用于治療高尿酸血癥，但URI具有穩(wěn)定性差、活性半衰期短、易被酶降解及體內活性低等缺點。脂質體(Liposomes，LPs)是一種具有類脂雙分子層，可將藥物包封在雙分子層中，形成超微型球狀的載體制劑。它具有生物膜的相

2、似性，能提高包封藥物的穩(wěn)定性，降低藥物毒副作用和免疫原性，提高被包封藥物的生物利用度，延長藥物生物半衰期等優(yōu)點，并具有一定的靶向和緩釋作用。本文選取了4種不同的緩沖液制備了ULPs，并對ULPs的活性、穩(wěn)定性、藥效學和ULP2的藥代動力學進行了初步研究。
　　方法:
　　1.采用逆向蒸發(fā)法制備ULPs。使用Tris-HCl緩沖液、Bicine-NaOH緩沖液、Tricine-NaOH緩沖液和Boric acid-Borax緩

3、沖液分別制備ULP1、ULP2、ULP3和ULP4。
　　2.采用葡聚糖凝膠柱法測定ULPs的包封率，使用馬爾文粒度儀測定ULPs的粒徑和Zeta電位。
　　3.考察ULPs在體外的活性。測定游離URI和ULPs的最適溫度、最適pH，以及兩者在最適溫度和最適pH條件下的活性大小。
　　4.考察ULPs在體外的穩(wěn)定性。通過對貯存穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性、酸堿穩(wěn)定性和抗胰蛋白酶水解能力進行測定，考察兩者體外穩(wěn)定性的情況。
　

4、　5.考察ULPs的藥效學。建立高尿酸血癥模型小鼠，通過測定小鼠體內的血尿酸水平，初步考察ULPs的藥效學。
　　6.考察ULP2的藥代動力學特性。選用SD大鼠，通過測定大鼠血清中URI的活性，考察ULP2的體內藥代動力學特性。
　　結果:
　　1.本實驗成功制備了ULP1、ULP2、ULP3和ULP4，制得的制劑外觀均勻，穩(wěn)定性良好。
　　2.ULP1、ULP2、ULP3和ULP4的平均包封率分別為51.88％

5、、56.45％、51.82％和54.19％，其中ULP2的包封率最高。ULP1、ULP2、ULP3和ULP4的平均粒徑分別為330.8 nm、280.5 nm、263.1 nm和265.7 nm，平均Zeta電位分別為-18.9mV、-19.0 mV、-14.3 mV和-29.0mV。
　　3.游離URI的最適溫度均為40℃;ULP1、ULP2、ULP3和ULP4的最適溫度分別為40℃、50℃、40℃和40℃。游離URI的最適pH

6、均為8.5，其中URI2的活性最高;ULPs的最適pH均為8.0，其中ULP2的活性最高。體外活性測定結果表明ULPs的活性均高于游離URI，其中ULP2的活性最大。
　　4.穩(wěn)定性結果顯示，ULPs的穩(wěn)定性均明顯高于游離URI。ULP2的貯存穩(wěn)定性和抗胰蛋白酶水解能力是制劑中最穩(wěn)定的。
　　5.藥效學測定結果顯示ULPs較游離URI有更好的降體內血尿酸水平的作用，其中ULP2是制劑中降血尿酸水平最顯著的。
　　6.藥

7、代動力學實驗結果表明，使用Bicine-NaOH緩沖液制備的ULP2能很好地改善游離URI的藥代動力學特性，提高游離URI的生物利用度。
　　結論:
　　本實驗制備的ULPs能提高游離URI在體外的活性、穩(wěn)定性和降血尿酸水平的能力，不同的緩沖液種類對ULPs的體內外相關性質有影響，4種緩沖液中Bicine-NaOH緩沖液制備的ULP2在體外活性最高，貯存穩(wěn)定性和抗胰蛋白酶水解能力最好，體內有顯著的降血尿酸水平作用，ULP2藥