不同實驗方法檢測糞腸球菌毒力因子gelE敏感度差異.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:通過使用普通兩步法RT-PCR與Real-timePCR檢測糞腸球菌毒力因子gelE的表達，評價Real-timePCR技術(shù)測定糞腸球菌mRNA表達水平的價值。
　　 方法:培養(yǎng)糞腸球菌國際標(biāo)準(zhǔn)株ATCC29212，提取細(xì)菌基因組總RNA，測定基因組總RNA濃度，將基因組總RNA按照1∶10-1∶107進行梯度稀釋，將RNA逆轉(zhuǎn)錄cDNA，采用Real-timePCR及RT-PCR檢測糞腸球菌gelE基因表達水平的差異。<

2、br>　　 結(jié)果:RT-PCR檢測可見有陽性擴增條帶的最大稀釋度為1∶103，基因表達敏感度為550pg/ul。Real-timePCR在稀釋為1∶105仍出現(xiàn)陽性擴增曲線，其基因表達敏感度為5.5pg/ul，Real-timePCR在測定糞腸球菌毒力因子gelE敏感度下限是常規(guī)RT-PCR的100倍。
　　 結(jié)論:1RT-PCR及Real-timePCR都可作為檢測糞腸球菌mRNA定量分析的方法。2檢測糞腸球菌毒力因子gel

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