不同遺傳譜系腸外大腸埃希菌毒力因子檢測.pdf

1、目的:
　　 腸外致病性大腸埃希菌(ExPEC)是引起泌尿系感染的最主要致病菌，同時也是引起新生兒腦膜炎和新生兒敗血癥的主要致病菌之一，也可以引起醫(yī)院獲得性肺炎等多種疾病。與致腹瀉性大腸埃希菌不同的是ExPEC的致病機制主要由其攜帶的毒力因子情況決定，ExPEC的致病嚴重程度也與其遺傳譜系分型情況相關。為了了解天津地區(qū)ExPEC毒力因子攜帶情況及遺傳譜系分型情況，本課題選取210株不同來源的ExPEC菌株作為研究對象，通過檢測菌

2、株30種毒力因子(VFs)，了解其基因的檢出情況，不同來源單個基因的分布情況;通過對ExPEC菌株進行遺傳譜系分型，將菌株分為A組、B1組、B2組和D組，了解其系統(tǒng)化分組情況，不同來源菌株系統(tǒng)化分組的差異情況。初步探討ExPEC毒力因子與遺傳譜系分型之間的關系，探究ExPEC的分子流行病學特點，以便為更好的了解ExPEC提供臨床解讀。
　　 方法:
　　 收集2010年12月至2011年12月分離的共210株分離自痰液、

3、尿液、血液及其他部位的非重復感染大腸埃希菌作為實驗菌株。根據來源不同將菌株分為Ⅰ組（痰液組）、Ⅱ組（尿液組）和Ⅲ組（血液、拭子及分泌物等）。將30對毒力因子基因根據擴增片段的大小分為5組，分別采用6重3步PCR方法進行基因片段擴增，然后通過瓊脂糖凝膠電泳的方式判斷毒力因子基因的檢出情況;并分別統(tǒng)計不同來源菌株單個毒力因子基因檢出情況及單個菌株毒力因子基因檢出數量進行比較。采用3重2步PCR方法對遺傳譜系分型3種基因進行擴增，通過比對瓊脂

4、糖凝膠電泳產生條帶情況對ExPEC菌株進行分組，并根據不同來源菌株進行分組比較。對臨床分離菌株毒力因子基因的檢出情況與遺傳譜系分型情況進行統(tǒng)計學分析，比較菌株遺傳譜系分型各組間毒力因子基因的檢出情況有否差異。
　　 結果:
　　 ExPEC中毒力因子基因fimH、fyuA、traT、iutA、kpsMTⅡ、PAI的檢出率較高，分別為79％、75％、74％、73％、62％和46％;不同來源的ExPEC菌株分組比較顯示有5種

5、毒力因子在非尿液來源中檢出率更高，分別是papGalleleⅡ(Internal)、papC、papA、papEF和rfc。
　　 ExPEC菌株遺傳譜系分型4個系統(tǒng)進化組A組、B1組、B2組和D組分別以3個基因的檢出情況判斷:chuA（-）、YjaA（+/-）和TSPE4.C2（-）;chuA（-），YjaA（+/-）和TSPE4.C2(+);chuA(+)，YjaA(+)，TSPE4.C2（+/-）和chuA(+)，YjaA

6、（-）和TSPE4.C2（+/-）。4個系統(tǒng)進化組所占比例分別為24％、11％、29％和36％;不同來源的ExPEC遺傳譜系分型情況也略有不同，統(tǒng)計結果顯示痰標本來源的菌株比尿液標本來源的菌株中分型為B2組的更多，而其他各組之間的比較無統(tǒng)計學意義。
　　 在進行ExPEC菌株遺傳譜系分型各組之間毒力因子基因檢出情況的統(tǒng)計學比較顯示，6種毒力因子基因的檢出情況與細菌遺傳譜系分型之間無統(tǒng)計學差異，它們分別是traT、iutA、pag

7、G alleⅢ、ibeA、papG flanking、sfaS;毒力因子中有8種僅與B2組聯系密切，分別是pagG alleⅡ、papA、sfa/focDE、hlyA、rfc、cnfl、cvaC和focG;有4種僅與D組聯系密切，分別是papGflankingⅡanaⅢ、afa/draBC、kpsMTⅢ和nfaE;有6種與B2組和D組均有關系，分別是fyuA、PAI、K5、papEF、K1和papC。在對菌株毒力因子基因檢出個數的統(tǒng)計發(fā)

8、現隨著菌株毒力因子檢出個數的增加，A組及B1組所占比例逐漸減少，而B2組和D組，尤其是B2組所占比例逐漸增加。
　　 結論:
　　 ExPEC存在毒力因子以及毒力因子的種類和數量影響菌株的致病性，毒力因子基因fimH、fyuA、traT、iutA、kpsMTⅡ、PAI在菌株中存在廣泛的流傳性;非尿液來源標本引起機體致病可能需要種類更廣泛、毒力更強的毒力因子的存在，從痰液標本分離出的ExPEC菌株可能比來自于尿液標本的菌株