HPLC同時(shí)測(cè)定食品中酸性橙Ⅱ和堿性嫩黃O方法建立及優(yōu)化.pdf

1、酸性橙Ⅱ(Acid OrangeⅡ)和堿性嫩黃O(Auramine O)作為非食用色素比其他水溶性染料更易染色且不易褪色，但是因?yàn)槟壳吧袩o(wú)這兩種非食用色素的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)推薦分析方法，因此常被不法商販違法添加于各類食品中。本研究建立并優(yōu)化高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)此2類非食用色素的方法，并通過(guò)加標(biāo)回收率的變化分析，對(duì)酸性橙Ⅱ和堿性嫩黃O的前處理?xiàng)l件進(jìn)行研究，同時(shí)利用此方法對(duì)市場(chǎng)中不同食品進(jìn)行抽檢。主要研究結(jié)果如下:
　　1.根據(jù)酸性橙Ⅱ和堿

2、性嫩黃O的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，建立等梯度固定波長(zhǎng)高效液相色譜法檢測(cè)2種非食用色素。對(duì)高效液相色譜中色譜柱、柱溫、流動(dòng)相種類及比例、流速、波長(zhǎng)等影響因素進(jìn)行了研究及優(yōu)化，得到優(yōu)化后的色譜檢測(cè)條件為:色譜柱為Kromasil C18(4.6×150mm，5um);流動(dòng)相為甲醇-50mmol/L乙酸銨溶液(V∶V)=50∶50;流速:1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)450nm;柱溫35℃。在上述條件下，堿性嫩黃O的保留時(shí)間為7.632min，酸性橙Ⅱ的保

3、留時(shí)間為11.548min，堿性嫩黃O和酸性橙Ⅱ的理論塔板數(shù)分別為3021和9084，峰底寬分別為0.477和0.435，分離度分別為5.62和7.11，且峰型正常，無(wú)拖尾現(xiàn)象。
　　2.采用超聲離心法提取不同食品中的酸性橙Ⅱ和堿性嫩黃O，并應(yīng)用建立的高效液相色譜法定量測(cè)定2種物質(zhì)的含量，以這2種非食用色素的總加標(biāo)回收率為指標(biāo)，考察提取劑種類、超聲提取時(shí)間、超聲次數(shù)、固液比、超聲溫度5個(gè)前處理的提取參數(shù)，最后用響應(yīng)面法優(yōu)化前處理。

4、得到食品中酸性橙Ⅱ和堿性嫩黃O的最佳前處理提取參數(shù)為:提取劑為甲醇，超聲時(shí)間30min，超聲溫度20℃，固液比為1∶3，超聲次數(shù)為3。此條件下實(shí)際檢測(cè)結(jié)果為酸性橙Ⅱ回收率90.03％，堿性嫩黃O回收率為87.26％。
　　3.對(duì)建立及優(yōu)化的HPLC同時(shí)檢測(cè)酸性橙Ⅱ和堿性嫩黃O的方法進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)。分析結(jié)果表明:酸性橙Ⅱ在進(jìn)樣量0.025-0.125ug范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=2*106X-1240.1(r=0.999

5、9)，最低檢出限為0.120ug/kg，精密度為1.19％，在腐竹、黃魚(yú)、榨菜、雞肉、辣椒粉等5類食品中的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD為分別為1.11％、1.98％、1.78％、1.93％、1.80％，日內(nèi)穩(wěn)定性RSD為1.18％，在五類食品中的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別為90.47％(RSD1.2％)、80.53％(RSD1.3％)、88.93％(RSD0.8％)、80.38％(RSD2.0％)、83.10％(RSD=1.8％)。
　　堿性

6、嫩黃O在進(jìn)樣量0.025-0.125ug范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=7*106X-5284.2(r=0.9996)，最低檢出限為0.032ug/kg，精密度為1.10％，在腐竹、黃魚(yú)、榨菜、雞肉、辣椒粉等5類食品中的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD為分別為1.47％、1.88％、1.87％、1.85％、1.93％，日內(nèi)穩(wěn)定性RSD為0.87％，在五類食品中的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別為102.64％(RSD=1.8％)、84.76％(RSD=

7、1.7％)、89.12％(RSD=1.4％)、98.42％(RSD=1.6％)、86.8％(RSD=2.2％)。
　　4.應(yīng)用本研究建立的高效液相色譜法檢測(cè)市場(chǎng)上不同食品中違法添加酸性橙Ⅱ和堿性嫩黃O的含量。本次抽檢樣品包括市售以及超市的豆制品（包括腐竹、豆干等）、肉制品（雞爪、真空包裝雞肉等）、鮮活類制品（黃魚(yú)、真空包裝黃魚(yú)等）、調(diào)味品（包括辣椒粉、豆瓣醬等）共40份樣品，在市售的辣椒粉中檢測(cè)到酸性橙Ⅱ含量為5.34 mg/kg