土壤中四類典型抗生素的同時測定及其方法優(yōu)化.pdf

1、抗生素不但被廣泛用于人和動物的防病治病，還被添加于動物飼料中作為飼料添加劑以提高飼料利用率和促進動物生長。近年來，隨著禽畜養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模的不斷擴大，抗生素使用量大增，抗生素濫用的問題越來越突出。進入動物體內(nèi)的抗生素不能被完全吸收，部分會隨著動物的排泄物排出體外。而大量糞便通常未經(jīng)處理便作為有機肥施于農(nóng)田，抗生素隨著糞便不斷進入到土壤，對生態(tài)環(huán)境和人體健康構(gòu)成嚴重威脅。
　　 抗生素作為新型環(huán)境污染物已引起國內(nèi)外的高度關(guān)注。建立土壤中

2、抗生素高精度多組分檢測方法成為關(guān)注的熱點。本論文擬建立同時測定土壤中多種抗生素的高精度檢測方法并對其進行優(yōu)化，這一方法對土壤抗生素的污染研究具有重要的理論和現(xiàn)實意義。
　　 目的：
　　 1.對方法的主要參數(shù)條件、萃取劑和填充劑進行優(yōu)化，建立提取土壤抗生素的加速溶劑萃取法。
　　 2.建立同時測定土壤中磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類15種抗生素的加速溶劑萃取-固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(ASE-SP

3、E-HPLC-MS/MS)分析方法，并對方法進行優(yōu)化。
　　 3.在相同試驗條件下，對加速溶劑萃取方法(ASE)和超聲萃取方法(SAE)進行比較，為土壤抗生素提取方法的研究提供參考。
　　 方法：
　　 1.提取:ASE方法中，土樣以乙腈-磷酸鹽緩沖液為萃取劑，EDTA處理的硅藻土為分散劑，在壓力1500 psi，溫度70℃，靜態(tài)萃取10 min，循環(huán)1次的參數(shù)下完成萃取。SAE方法中，土樣以乙腈-磷酸鹽緩沖液為

4、萃取劑，通過振蕩混勻、超聲和離心完成萃取，殘渣反復(fù)提取兩次。
　　 2.凈化富集（濃縮）:萃取液通過SAX-HLB串聯(lián)柱凈化富集，6 ml甲醇洗脫，氮氣吹至近干，復(fù)溶于1 ml甲醇-水(v∶v=1∶1)溶液。
　　 3.檢測:目標抗生素以0.1％甲酸溶液(A)和乙腈(B)為流動相，流速0.4 ml/min，進樣量10μl，柱溫20℃，通過梯度洗脫進行分離，在HPLC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）下進行檢測。

5、　　 結(jié)果：
　　 1.用ASE-SPE-HPLC-MS/MS方法對加標土樣進行提取、檢測，磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素回收率范圍分別為72.3％～93.6％，63.2％～90.2％，60.2％～85.4％，67.2％～78.9％，相對標準偏差RSD＜10％。檢測限依次為0.5～0.9μg/kg，1.3～1.6μg/kg，0.2～1.1μg/kg，0.2～0.3μg/kg，相關(guān)系數(shù)r＞0.99，線性關(guān)系良好。<

6、br>　　 2.用SAE法土樣提取加標土樣，四類抗生素加標回收率范圍在51.6％～80.6％之間，RSD均小于11％。用SAE方法和ASE方法，采用相同萃取劑在各自最優(yōu)條件下提取加標200μg/kg的土樣，前者用時96min，萃取劑18 ml，四類抗生素回收率在50％～80％，后者用時18 min，萃取劑36 ml，回收率在60％～85％。
　　 結(jié)論：
　　 1.優(yōu)化后的ASE方法能在16 min內(nèi)完成土壤抗生素的萃