利用介孔材料固定化木瓜蛋白酶制備扇貝抗氧化活性肽.pdf

1、隨著人們對(duì)功能性食品和保健營(yíng)養(yǎng)品需求的增加，來(lái)源于海洋生物和海洋加工副產(chǎn)物的抗氧化活性肽，因?yàn)榫哂星宄杂苫?、螯合金屬離子等抗氧化作用，并且食用安全、生產(chǎn)成本低，使其在功能性食品的開(kāi)發(fā)中極具潛力。扇貝是我國(guó)重要的海洋貝類(lèi)資源，不但產(chǎn)量豐富，而且還具有多種保健功能，是開(kāi)發(fā)海洋生物活性肽的重要來(lái)源。介孔材料因其高度有序的孔道結(jié)構(gòu)和較大的比表面積且具有高的熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性，而成為了酶固定化的良好載體。
　　本論文采用自制的介孔材料M

2、CM-41固定木瓜蛋白酶，分析固定化酶的特性及最適酶解條件，并應(yīng)用固定化酶水解扇貝蛋白結(jié)合酶膜反應(yīng)器制備抗氧化活性肽，為高值化海洋生物活性多肽產(chǎn)品的生產(chǎn)提供參考依據(jù)。
　　（1）制備了孔道內(nèi)具有自由羥基的MCM-41介孔材料，利用透射電鏡和傅里葉紅外光譜對(duì)材料進(jìn)行表征，完成了MCM-41的氨基化修飾和羧基化修飾；制備出大顆粒MCM-41介孔材料，直徑約為80μM，成良好的球狀結(jié)構(gòu)，具有良好的孔道分布。
　?。?）利用自制的介

3、孔材料MCM-41、N-MCM-41、C-MCM-41和L-MCM-41固定木瓜蛋白酶，以酶活力為指標(biāo)，測(cè)得L-MCM-41具有最高的酶比活力，故選取L-MCM-41作為固定化酶的載體。通過(guò)正交試驗(yàn)確定其最優(yōu)固定化條件：酶與L-MCM-41的質(zhì)量比為1:0.25，pH為7.6，戊二醛濃度為1％，激活劑濃度為40 mmol/L半胱氨酸和2 mmol/L EDTA。測(cè)得此固定化酶的比活力和酶活回收率分別為511.111 U/g和82.79%

4、，并確定其最適酶解條件為：pH7.0，溫度70℃，且具有更高的溫度和pH穩(wěn)定性。
　?。?）優(yōu)化了酶解扇貝蛋白制備抗氧化活性肽的工藝，以?OH清除率和?DPPH清除率為指標(biāo)，將酶解時(shí)間由原來(lái)的16 h優(yōu)化為7 h，從而大大縮短了實(shí)驗(yàn)周期，提高了實(shí)驗(yàn)效率。
　　分別利用游離的蛋白酶和固定化蛋白酶水解扇貝蛋白，測(cè)定不同分子質(zhì)量扇貝肽的抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)固定化酶可以得到更高抗氧化活性的扇貝肽。分子量小于1 kDa時(shí)，扇貝活性肽的還原