木瓜蛋白酶水解β-酪蛋白膜的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：采用消散因子石英晶體微天平（QCM-D）體外原位、實(shí)時(shí)和動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)β-酪蛋白（β-CN）生物膜在Au石英晶體表面的組裝形成過(guò)程和木瓜蛋白酶水解β-CN生物膜的動(dòng)力學(xué)過(guò)程，比較不同酶濃度的水解效率。采用接觸角測(cè)量?jī)x（CAM）考察β-CN生物膜經(jīng)酶水解前后表面性狀的變化，通過(guò)原子力顯微鏡（AFM）觀察β-CN生物膜經(jīng)酶水解前后表面形貌和粗糙度的變化。方法：QCM-D監(jiān)測(cè)β-CN吸附于自組裝膜上造成的頻率（F）、生物膜質(zhì)量（m）、和厚度（

2、h）變化。根據(jù)Langmuir（L）和Freundlich（F）吸附等溫線的相關(guān)系數(shù)（R2）判斷β-CN在自組裝單層膜上的吸附行為。QCM-D上建立體外β-CN生物膜模型，采用不同濃度的木瓜蛋白酶水解蛋白膜，觀察?F以及m、h的改變，運(yùn)用Boltzmann S形方程對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，單因素方差分析和SNK-q檢驗(yàn)比較水解參數(shù)B、?m、?h、V50、C和1/C。采用CAM和AFM分別考察純Au（a）、包被11-MUA（b）、激活羧基（c

3、）、固定有β-CN（d）以及分別經(jīng)0.5 μg/ml（e）和12.5 μg/ml（f）的木瓜蛋白酶水解芯片表面的β-CN后接觸角的變化和芯片表面形貌和粗糙度變化。配對(duì)t檢驗(yàn)比較F和L吸附等溫線的相關(guān)系數(shù)，單因素方差分析和SNK-q檢驗(yàn)比較成膜參數(shù)?F、?m、?h，水解參數(shù)B、?m、?h、V50、C和1/C，接觸角測(cè)量值以及均方粗糙度之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。檢驗(yàn)水平α=0.05。結(jié)果：在臨界膠束濃度內(nèi)，隨著β-CN濃度升高，膜的質(zhì)量和厚度增加（

4、P＜0.05），L吸附等溫線能夠更好的描述β-CN在SAM上的吸附行為。隨著酶濃度增大，膜的厚度?h減薄，?F上升增多，水解參數(shù)B增大，C減小，V50縮短（P＜0.05）。接觸角大小為c＞b＞d＞e＞f＞a（P<0.05）。芯片表面的β-CN顆粒經(jīng)酶水解后減少甚至消失，均方粗糙度大小為d＞e＞f＞c（P＜0.05）。結(jié)論：在臨界膠束濃度內(nèi)，β-CN在SAM上形成的膜為單層膜。
　　 在本實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)水解蛋白生物膜時(shí)，酶的水解效