Raf-1激酶對(duì)SAH后腦血管痙攣及早期腦損傷的作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后Raf-1激酶在基底動(dòng)脈壁表達(dá)變化的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:研究蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后基底動(dòng)脈壁磷酸化Raf-1表達(dá)變化規(guī)律，探討其與腦血管痙攣的關(guān)系。
　　 方法:72只SD大鼠被隨機(jī)分為對(duì)照組、SAH3d組、SAH5d組和SAH7d組，利用枕大池二次注血法建立大鼠SAH模型，應(yīng)用光鏡觀察SAH后基底動(dòng)脈管腔面積及管壁形態(tài)改變，并應(yīng)用免疫組化法和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)基底動(dòng)脈壁磷酸化Raf-1的

2、表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)成功地制作了大鼠SAH模型，對(duì)照組、SAH3d組、SAH5d組和SAH7d組的管腔面積分別為57，944±5，581μm2、26，100±2，639μm2、19，723±2，412μm2和28，800±2，980μm2；SAH后第3天基底動(dòng)脈就已明顯狹窄，管壁增厚、內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞變性，第5天達(dá)高峰，第7天有所減輕；基底動(dòng)脈壁磷酸化Raf-1在SAH后第3天即呈陽(yáng)性表達(dá)，第5天最為明顯，第7天有

3、所減弱。
　　 結(jié)論: SAH后基底動(dòng)脈壁磷酸化Raf-1表達(dá)上調(diào)，其活化水平在時(shí)相上的改變與基底動(dòng)脈管腔狹窄及病理變化程度密切相關(guān)，提示Raf-1激酶在腦血管痙攣病理過(guò)程中可能起重要作用。
　　 第二部分 Raf-1激酶對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣的作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:通過(guò)觀察Raf-1激酶抑制劑BAY43-9006對(duì)SAH后腩血管痙攣的影響，進(jìn)一步探討Raf-1激酶在腦血管痙攣發(fā)生中的可能機(jī)制

4、。
　　 方法:144只SD大鼠被隨機(jī)分為對(duì)照組、SAH組、SAH+Vehicle組和SAH+BAY43-9006組，枕大池二次注血法建立大鼠SAH模型，應(yīng)用光鏡觀察基底動(dòng)脈管腔面積及管壁形態(tài)改變，并應(yīng)用免疫組化法和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)基底動(dòng)脈磷酸化Raf-1的表達(dá)變化，并檢測(cè)磷酸化ERK1/2和胞核NF-κB的表達(dá)變化，基底動(dòng)脈IL-6和IL-1βmRNA的水平也同時(shí)檢測(cè)。
　　 結(jié)果:血管痙攣在SAH組和SAH+Vehi

5、cle組最重，管腔面積分別為17，225±4，436μm2和19，780±7，870μm2，Raf-1、ERK1/2和NF-κB在SAH后明顯激活，IL-6和IL-1βmRNA表達(dá)亦明顯增強(qiáng)，應(yīng)用BAY43-9006干預(yù)能抑制Raf-1、ERK1/2和NF-κB的活化及減少I(mǎi)L-6和IL-1β mRNA的表達(dá)，同時(shí)減輕了血管痙攣的程度。
　　 結(jié)論: Raf-1/ERK1/2和Raf-1/NF-κB信號(hào)通路在SAH后基底動(dòng)脈呈現(xiàn)

6、顯著激活，Raf-1可能通過(guò)此二條通路參與腦血管痙攣的發(fā)生，應(yīng)用Raf-1激酶抑制劑可以減輕血管痙攣。
　　 第三部分 Raf-1激酶對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:研究Raf-1激酶對(duì)SAH后早期腦損傷的作用，探討Raf-1激酶在早期腦損傷發(fā)生中的可能機(jī)制。
　　 方法:96只SD大鼠被隨機(jī)分為對(duì)照組、SAH組、SAH+DMSO組和SAH+BAY43-9006組，視交叉前池注血

7、法建立大鼠SAH模型，通過(guò)檢測(cè)SAH后24h血腦屏障通透性、腦含水量和腦皮層細(xì)胞凋亡比例評(píng)價(jià)腦損傷，并應(yīng)用免疫組化法和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)腦皮層磷酸化Raf-1的表達(dá)變化，并檢測(cè)磷酸化ERK1/2和胞核NF-κB的表達(dá)變化，腦皮層MMP-9、VEGF、COX-2和IκB-α的水平也同時(shí)檢測(cè)。
　　 結(jié)果:視交叉前池注血大鼠SAH模型能增加血腦屏障的破壞、腦水腫和細(xì)胞凋亡，并能導(dǎo)致磷酸化Raf-1、磷酸化ERK1/2和胞核NF-κB的

8、表達(dá)增加，同時(shí)伴有MMP-9、VEGF和COX-2的表達(dá)增加和IκB-α表達(dá)減少：應(yīng)用BAY43-9006能抑制Raf-1、ERK1/2和NF-κB的活化，減少M(fèi)MP-9、VEGF和COX-2的表達(dá)，增加IκB-α的表達(dá)，同時(shí)減輕了早期腦損傷的程度。
　　 結(jié)論: Raf-1/ERK1/2和Raf-1/NF-κB3信號(hào)通路在SAH后腦組織中存在明顯激活，Raf-1可能通過(guò)此二條通路參與SAH后早期腦損傷的發(fā)生，抑制Raf-1激酶