川芎嗪對(duì)SD大鼠SAH后腦血管痙攣病理變化的影響及對(duì)腦的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:川芎嗪對(duì)SD大鼠SAH后腦血管痙攣病理變化的影響及對(duì)腦的保護(hù)作用
　　 材料與方法:采用枕大池二次注血法制備蛛網(wǎng)膜下腔出血模型,選用健康成年SD大鼠60只隨機(jī)分成A、B、C、D4組,根據(jù)設(shè)計(jì)時(shí)間點(diǎn)不同各組均分為3個(gè)亞組,每個(gè)亞組5只。A組為生理鹽水對(duì)照組,即用生理鹽水進(jìn)行枕大池注入；B組為SAH組:BⅠ、BⅡ、BⅢ亞組分別為SAH模型制作成功后再飼養(yǎng)1天、4天及7天；C組為SAH+尼莫同組:CⅠ、CⅡ、CⅢ亞組分別為SAH

2、模型制作成功后腹腔內(nèi)注入尼莫同0.1mg,以后每天腹腔內(nèi)注入尼莫同0.1mg,再飼養(yǎng)1天、4天及7天； D組為SAH+TMP組:DⅠ、DⅡ、DⅢ亞組分別為SAH模型制作成功后腹腔內(nèi)注入鹽酸川芎嗪20mg,以后每天腹腔內(nèi)注入鹽酸川芎嗪20mg,再飼養(yǎng)1天、4天及7天。各組均在規(guī)定時(shí)間點(diǎn)斷頭取腦:在開(kāi)顱后將海馬從大腦組織中分離,連同腦干及基底動(dòng)脈取下制成標(biāo)本。最后切片行H-E染色、Bax、Bcl-2、NF-kBp65和Cox-2免疫組化染色

3、,分別觀察海馬區(qū)神經(jīng)元的存活情況及Bax和Bcl-2的表達(dá)；觀察血管壁中NF-kB,Cox-2的變化；觀察基底動(dòng)脈血管腔橫截面積及血管壁的病理變化.
　　 結(jié)果:
　　 H-E染色切片于光鏡下見(jiàn)生理鹽水對(duì)照組(A組)基底動(dòng)脈管壁平滑,結(jié)構(gòu)完整,與正常血管無(wú)差異。SAH組(B組)與A組比較有顯著差異,基底動(dòng)脈均不同程度地出現(xiàn)管徑變窄,管壁增厚,內(nèi)膜出現(xiàn)皺折,內(nèi)皮細(xì)胞部分脫落,內(nèi)彈力層明顯皺折,厚薄不一,有斷續(xù)血管平滑肌細(xì)胞

4、肥大,扭曲變形,空泡變性,部分壞死,胞漿濃染,胞核固縮外膜變厚,出現(xiàn)粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn),以day7時(shí)最重。SAH+尼莫同組(C組)與B組比較,早期血管痙攣減輕,但后期管壁亦出現(xiàn)炎性增厚改變。SAH+TMP組(D組)與B組比較,血管痙攣減輕,管壁較薄,內(nèi)皮皺折現(xiàn)象減弱,肌層及外膜基本正常,偶見(jiàn)粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 免疫組化結(jié)果
　　 NF-kBp65免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞主要在血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的胞漿和胞核內(nèi)表達(dá)

5、； COX2免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞主要在動(dòng)脈壁內(nèi)皮和外膜觀察到著色均勻。二者當(dāng)不用一抗或被同類型的對(duì)照抗體替換時(shí),染色缺乏。A組免疫組化結(jié)果顯示幾乎無(wú)表達(dá),B組及C組表達(dá)明顯,D組有表達(dá),但明顯較B,C組減弱。,
　　 H-E染色切片于光鏡下計(jì)數(shù)海馬CA1區(qū)存活神經(jīng)元密度,A組未見(jiàn)神經(jīng)元凋亡；B組可見(jiàn)大量錐體細(xì)胞凋亡；C組亦可見(jiàn)錐體細(xì)胞凋亡但較B組稍減少。D組海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡程度較B、C組同時(shí)間點(diǎn)明顯減輕。免疫組化染色切片觀察

6、見(jiàn):Bcl-2和bax陽(yáng)性細(xì)胞主要為胞質(zhì)著色,棕黃色,呈均勻彌漫染色。(1)Bcl-2免疫陽(yáng)性細(xì)胞觀察結(jié)果如下:在A組,bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞在海馬神經(jīng)元中幾乎未見(jiàn)表達(dá),B、C、海馬CAl區(qū)bcl-2可見(jiàn)表達(dá),D組與B、C組相比,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多且較強(qiáng)。(2)bax免疫陽(yáng)性細(xì)胞觀察結(jié)果如下:正常組A組,bax陽(yáng)性細(xì)胞在海馬神經(jīng)元中有很微弱的表達(dá),B、C、D組海馬CA1區(qū)bax表達(dá)明顯。B、C組與D組相比,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多且較強(qiáng)。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析后

7、,各組之間兩兩對(duì)比顯示神經(jīng)元存活數(shù)目及Bcl-2和bax表達(dá)強(qiáng)度存在顯著性差異。
　　 結(jié)論:
　　 1、SAH引起腦血管狹窄的因?yàn)?早期可能是因?yàn)檠阅X脊液的機(jī)械性和化學(xué)性刺激引起血管痙攣所致；晚期主要由于血管壁的免疫炎癥反應(yīng)致使血管壁增厚,管腔變窄。
　　 2、SAH可使腦組織中Bcl-2、Bax、NF-kB、COX2的表達(dá)升高。
　　 3、川穹嗪(TMP)可能通過(guò)促進(jìn)了SAH大鼠抗凋亡基因Bcl-2