經鼻應用GGRP中樞性遞送評估及對SAH后腦血管痙攣的防治.pdf

1、動物實驗研究表明，CGRP能夠逆轉實驗性SAH后CVS。由于CGRP的大分子特性限制了其從血液循環(huán)中透過血腦屏障而進入腦組織和腦脊液，常規(guī)的給藥途徑難以奏效。本實驗的目的是尋找簡便有效而無創(chuàng)靶向中樞的給藥方法，探討經鼻（IN）給予CGRP避開血腦屏障（blood brain barrier，BBB）進入中樞的可行性，并證實其對SAH后CVS是否具有保護作用。 研究目的： （1）．探討經鼻給藥途徑可使CGRP繞過血腦屏障的

2、阻礙而有效進入中樞神經系統(tǒng)，并闡明其中樞分布特點。 （2）．經鼻靶向中樞給予CGRP對SAH后CVS大鼠腦血流量和循環(huán)內皮細胞的影響。 （3）．觀察經鼻應用CGRP對家兔實驗性SAH后CVS是否具有防治作用。 研究方法： （1）．SPF級健康Wistar大鼠48只，隨機分入六組①經鼻（IN）125I－CGRP正常組：在正常大鼠經鼻給予125I-CGRP50μl（1μg，20μCi）②經鼻125I-CGRP

3、 SAH組：造模后，經鼻給予125I-CGRP50μl（1μg，20μCi）③經鼻生理鹽水（NS）正常組：在正常大鼠經鼻給予NS50μl④靜注（Ⅳ）125I-CGRP正常組：在正常大鼠靜脈注射1251-CGRP300μl（1μg，20μCi）⑤靜注125I-CGRP SAH組：造模后，靜脈注射125I-CGRP300μl（1μg，20μCi）⑥靜注NS正常組：在正常大鼠，靜脈注射NS300μl。應用放射免疫技術，比較經鼻給藥和經靜脈注射

4、給藥后30min，放射性標記的CGRP在各腦區(qū)、頸髓、腦脊液、血和周圍組織中的定量分布。 （2）．采取枕大池二次注血法制作SAH后CVS模型。將64只清潔級Wistar大鼠隨機分為4組（n=16）：A組：正常對照組；B組：SAH組；C組：IN NS SAH組；D組：IN CGRP SAH組。觀察各組動物SAH術后行為變化；各組隨機抽取8只用激光多普勒血流儀動態(tài)記錄頂葉皮質局部腦血流量（rCBF）；余動物SAH后第三天，取靜脈血標

5、本檢測血管內皮細胞（VEC）凋亡。 （3）．將健康新西蘭兔32只隨機分為4組（n=8），A組：正常對照組；B組（SAH組）：經枕大池穿刺二次注血法，制作SAH后CVS的模型；C組：（IN NS SAH組）第二次穿刺注血后，經鼻給予NS0．4ml；D組：（IN CGRP SAH組）第二次穿刺注血后，經鼻給予CGRP（CGRP10μg溶媒0．4ml）。觀察動物SAH術后行為變化，全部兔于二次注血后3d分別進行腦血管造影，測量基底動脈

6、直徑；3d后快速斷頭處死，取腦，分離皮層和海馬組織，用干-濕重比較法計算腦組織含水率。 研究結果： （1）．IN給藥組腦部各分區(qū)、CSF和頸髓中的CGRP濃度較Ⅳ組顯著高出6-161倍（P<0．01），以嗅球的CGRP濃度最高，其次是CSF和頸髓。IN、IV給藥后，藥物分布在正常大鼠和SAH大鼠無顯著性差異。 （2）．B組和C組在誘導SAH后30 min rCBF即明顯低于A組，1h下降至最低值，在12 h內無明

7、顯恢復趨勢。經鼻給予CGRP的動物在SAH后rCBF下降的速度較慢，降低的程度亦明顯較B組和C組小。B組和C組的靜脈血CEC計數水平比A組顯著性升高（P<0．01），D組經鼻給予CGRP后CEC計數明顯降低（P<0．01）。 （3）．與正常組相比較，SAH組和IN NS SAH組基地動脈痙攣明顯，管徑變窄（P<0．01），與SAH組和IN NS SAH組相比較，IN CGRP SAH組血管痙攣得到明顯改善（P<0．01）。誘導S

8、AH后3d，SAH組和IN NS SAH組的腦組織含水率顯著高于正常對照組（P<0．01），IN CGRP SAH組與SAH組和IN NS SAH組相比，腦組織含水率明顯降低（P<0．01）。 研究結論： （1）．經鼻給藥方法可以避開BBB的障礙，迅速將CGRP遞送到CNS，使CNS獲得顯著提高的CGRP濃度。 （2）．SAH后腦實質血流量下降，經鼻應用CGRP可以顯著改善腦實質血流量；VEC損傷在SAH后CVS

9、發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，經鼻應用CGRP可減輕VEC損傷，保護血管內皮是CGRP預防SAH后CVS的可能機制之一；CVS后外周血液中CEC的數量增加，CEC可以作為SAH后CVS的預警因子。 （3）．經鼻應用CGRP可以防治家兔實驗性SAH后CVS。 目的： 探討降鈣素基因相關肽（CGRP）經不同途徑給藥，在生理和病理狀態(tài)下中樞性分布的特點，尋找一種無創(chuàng)、便捷、有效的中樞性給藥方法。 方法： 清潔

10、級（SPF）健康Wistar大鼠48只，隨機分入六組：①經鼻（IN）125I－CGRP正常組：在正常大鼠經鼻給予125I－CGRP50μl（1μg，20μCi）；②經鼻125I-CGRP SAH組：造模后，經鼻給予125I-CGRP50μl（1μg，20μCi）；③經鼻生理鹽水（NS）正常組：在正常大鼠經鼻給予NS50μl；④靜注（Ⅳ）125I-CGRP正常組：在正常大鼠靜脈注射125I-CGRP300μl（1μg，20μCi）；⑤靜注

11、125I-CGRP SAH組：造模后，靜脈注射125I-CGRP300μl（1μg，20μCi）；⑥靜注NS正常組：在正常大鼠靜脈注射NS300μl。應用放射免疫技術，比較經鼻給藥和經靜脈注射給藥后30min，放射性標記的CGRP在各腦區(qū)、頸髓、腦脊液、血和周圍組織中的定量分布。 結果： IN CGRP組腦部各分區(qū)、CSF和頸髓中的CGRP濃度較IV組顯著高出6-161倍（P<0．01），以嗅球的CGRP濃度最高，其次

12、是CSF和頸髓。IN、IV給藥后，藥物分布在正常大鼠和SAH大鼠無顯著性差異。 結論： SAH后經鼻嗅覺通路的給藥方法可以避開BBB的阻礙，迅速地將CGRP遞送到中樞神經系統(tǒng)（CNS），使CNS獲得顯著提高的CGRP濃度。 目的： 觀察經鼻應用CGRP對大鼠實驗性SAH后CVS是否具有防治作用，并初步探討其可能作用機制。 方法： 將64只清潔級Wistar大鼠隨機分為4組（n＝16），A

13、組：正常對照組；B組（SAH組）：經枕大池穿刺二次注血法，制作SAH后CVS的模型；C組：（IN NS SAH組）第二次穿刺注血后，經鼻給予NS50μl；D組：（IN CGRP SAH組）第二次穿刺注血后，經鼻給予CGRP（CGRP1μg溶媒50μl）。觀察各組動物SAH術后行為變化；各組隨機抽取8只用激光多普勒血流儀動態(tài)記錄頂葉皮質局部腦血流量（rCBF）；余動物SAH后第三天，取靜脈血標本檢測血管內皮細胞凋亡。 結果：

14、 B組和C組在誘導SAH后30 min rCBF即明顯低于A組，1h下降至最低值，在12 h內無明顯恢復趨勢。經鼻給予CGRP的動物在二次注血后rCBF下降的速度較慢，降低的程度亦明顯較B組和C組小。B組和C組的靜脈血CEC計數比A組顯著性升高（P<0．01），經鼻CGRP治療后CEC計數明顯降低（P<0．01）。 結論： SAH后腦實質血流量下降，經鼻應用CGRP可以顯著改善腦實質血流量；VEC損傷在SAH后CV

15、S發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，經鼻應用CGRP可減輕VEC損傷，保護血管內皮是CGRP預防SAH后CVS的可能機制之一。CVS后外周血液中CEC的數量增加，CEC可以作為SAH后CVS的預警因子。 目的： 觀察經鼻應用CGRP對實驗性兔SAH后CVS是否具有防治作用。 方法： 將健康新西蘭兔32只隨機分為4組（n＝8），A組：正常對照組；B組（SAH組）：經枕大池穿刺二次注血法，制作SAH后CVS的模型；C組

16、：（IN NS SAH組）第二次穿刺注血后，經鼻給予CGRP生理鹽水0．4ml；D組：（IN CGRP SAH組）第二次穿刺注血后，經鼻給予CGRP（CGRP10μg溶媒0．4ml）。觀察動物SAH術后行為變化，全部白兔于二次注血后3d分別進行腦血管造影，測量基底動脈直徑；3d后快速斷頭處死，取腦，分離皮層和海馬組織，用干一濕重比較法計算腦組織含水率。 結果： 1．與正常組組比較，SAH組和IN NS SAH組基地動脈痙