核酸序列依賴擴(kuò)增技術(shù)檢測侵襲性曲霉菌感染的實驗研究.pdf

1、目的:侵襲性曲霉菌感染（invasive aspergillosis，IA）是一種嚴(yán)重威脅免疫力低下病人生命的感染，早期準(zhǔn)確的診斷和治療是良好預(yù)后的關(guān)鍵。本研究首先建立核酸序列依賴擴(kuò)增(nucleic acid sequence-basedamplification，NASBA)檢測曲霉菌的方法，再結(jié)合熒光定量PCR(qPCR)及GM試驗應(yīng)用于IA的臨床診斷，確立IA的最佳實驗室診斷策略。
　　方法:首先在實驗室內(nèi)利用煙曲霉菌標(biāo)準(zhǔn)

2、株(CMCC Ala)建立NASBA結(jié)合電泳檢測曲霉菌的方法，并對其靈敏度、特異性進(jìn)行了評估。然后對NASBA結(jié)合分子信標(biāo)(MB)用于定量檢測曲霉菌的可行性進(jìn)行了探索。最后分別利用NASBA、熒光定量PCR及GM試驗三種方法對80例IA高危病患的血液標(biāo)本進(jìn)行檢測，計算三種診斷方法的各項性能指標(biāo)，并對各種診斷方案進(jìn)行比較，最終確定IA實驗室診斷的最佳方案。
　　結(jié)果:在實驗室內(nèi)成功建立NASBA檢測曲霉菌的方法，其特異性良好，靈敏度

3、達(dá)到了1 Cfu;曲霉菌孢子量的對數(shù)與MB熒光信號達(dá)到設(shè)定閾值時的時間存在線性相關(guān)關(guān)系(y=-10.7x+81.6，r=0.9889)。
　　NASBA、qPCR及GM試驗三種方法的靈敏度分別為76.47％、67.65％、52.94％，特異度分別為80.43％、89.13％、80.43％。聯(lián)合診斷結(jié)果顯示，NASBA與qPCR串聯(lián)方案有最好的特異度(100％)及陽性預(yù)測值(100％); NASBA與qPCR并聯(lián)方案則最為靈敏(94