FISH檢測(cè)快速診斷曲霉菌感染的臨床價(jià)值.pdf

1、目的：曲霉菌是自然界廣泛存在的真菌，是引起侵襲性真菌感染（IFI）的主要病原菌。IFI多見(jiàn)于免疫受損人群，死亡率較高，而臨床缺乏快速診斷方法，其實(shí)驗(yàn)室早期診斷至關(guān)重要。本研究旨在探討熒光原位雜交技術(shù)（FISH）在檢測(cè)系統(tǒng)性曲霉感染臨床標(biāo)本的可行性和特異性，以期早期診斷真菌感染。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)組為27例可疑真菌感染的福爾馬林固定、石蠟包埋的組織切片，陽(yáng)性對(duì)照為標(biāo)準(zhǔn)曲霉菌，陰性對(duì)照為未感染曲霉菌的組織石蠟切片，空白對(duì)照是不加探針

2、的標(biāo)本切片。將石蠟切片進(jìn)行二甲苯脫蠟、系列乙醇水化。以上分組采用經(jīng)地高辛末端標(biāo)記的與曲霉菌18S rRNA序列互補(bǔ)的18S-1寡核苷酸探針?lè)謩e進(jìn)行FISH檢測(cè)，同時(shí)對(duì)組織石蠟切片進(jìn)行HE及PAS染色。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組中14例標(biāo)本可見(jiàn)陽(yáng)性雜交信號(hào)，雜交信號(hào)為綠色顆粒狀熒光；13例未見(jiàn)雜交信號(hào)。陽(yáng)性對(duì)照顯示菌絲壁及菌絲內(nèi)雜交信號(hào)呈綠色的顆粒狀，呈局灶性或散在分布。陰性對(duì)照及空白對(duì)照未見(jiàn)雜交信號(hào)。HE及PAS染色可疑真菌感染分別為

3、23例和27例，部分組織顯示真菌的菌絲體，HE染色菌絲呈現(xiàn)紅色，著色不良，PAS染色菌絲呈品紅色，不能鑒定真菌種屬。
　　 討論 本研究利用針對(duì)曲霉菌靶序列的探針特異地檢測(cè)出組織石蠟切片中的曲霉菌，其陽(yáng)性信號(hào)清晰可見(jiàn)，可確定曲霉菌感染，因此可根據(jù)不同種屬曲霉菌設(shè)計(jì)出DNA序列特異性探針，明確各種曲霉菌種。而HE及PAS染色只能從形態(tài)學(xué)上觀察真菌形態(tài)，易漏診、誤診，更不能鑒別真菌菌種。在進(jìn)一步的研究中有望應(yīng)用該FISH方法快速檢測(cè)