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1、Universi加Code:10635StudentNumber:112008326002151ADissertationforMaster’sDegreeofsouthwestUniversitySuPPressionandComParisonofBrassicanaPusTTSGeneFamilybyRNAiandCRES一TMaster,5degreeeandidate:Rui一XiZhangSuPervisor:Assoeiat
2、eProf.Jia一MingYinProf.YOu一RongChaiSPeeialty:GeneticsDireetion:PlantGenetiesandBreedingChongqingChinaJune2011西南大學(xué)碩士學(xué)位論文3.8.2預(yù)培養(yǎng).........……,..................................................................................
3、..........……213.8.3浸染.............……,........................................................................................……,二213.8.4共培養(yǎng).................................................................................
4、……‘.……,............……213.8.5洗外植體(殺農(nóng)桿菌)...................................……213.8.6誘導(dǎo)抗性愈傷........................................................……,............................……223.8.7分化培養(yǎng)................................
5、.......................................................................……223.8.8分化莖...……,.…,..............................……,.............……,...........................……223.8.9長(zhǎng)莖.....................……,.................
6、......................……,......................................……223.8.10生根...............................................................................................................……233.8.11馴化及移栽.......……、.........
7、................................................……233.8.12農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化組培過(guò)程中的玻璃化現(xiàn)象研究..............................................……233.9轉(zhuǎn)基因再生植株分子檢測(cè)與性狀鑒定..................................................................……243.9.1
8、Basta復(fù)檢................................................................................……,................……243.9.2組織化學(xué)染色檢測(cè)GUS活性............................................……,.....……,.......……243.9.3再生植株的PcR檢測(cè)...........
9、........................................……243.9.4再生植株T:種籽粒色性狀考察.....................................................……,.......……253.9.5再生植株TI種籽花青素與類黃酮含量的測(cè)定..........................................……253.9.6再生植株種子皮殼率的測(cè)定..
10、........................................................……,.......……253.9.7再生植株種子千粒重的測(cè)定........................................................................……263.9.8再生植株結(jié)實(shí)率調(diào)查........................................……2
11、63.9.9再生植株莢角長(zhǎng)度調(diào)查.................................................................……263.9.10再生植株分枝數(shù)調(diào)查.........................................................................……263.10轉(zhuǎn)基因再生種子的體視顯微鏡觀察.......................…
12、…........................................……263.11轉(zhuǎn)基因再生植株了了百基因家族的表達(dá)檢測(cè).........................................................……263.11.1mRNA的反轉(zhuǎn)錄.............................................................................
13、……263.11.2調(diào)BnZos內(nèi)標(biāo)..................................................................……273.11.3半定量RTPCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因再生植株BnTT石基因家族的抑制水平.......……274.1蕓蔓屬了了萬(wàn)基因家族RNA干擾載體的構(gòu)建.........................................................……29
14、4.1.1蕓蔓屬27百基因家族RNA干擾片段的克隆..................……幾.....................……294.1.2蕓蔓屬TTS基因家族RNA干擾載體的構(gòu)建.............................................……294.1.3重組載體轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌及鑒定......................................……,...……,.……304.2蕓
15、蔓屬了了客基因家族CRES一T載體的構(gòu)建...........................................................……314.2.1蕓蔓屬了珊基因家族4條CRES一T片段的擴(kuò)增........................................……314.2.2從重組pMD19一T載體切下了珊家族的CRES一T片段......……,.................……344.2.
16、3植物表達(dá)載體pC23OIMISDPB和pC230lMISMpB骨架的制備...........……344.2.4重組形成CRES一T載體、轉(zhuǎn)化和鑒定...........................................……,.......……344.3RNA干擾和CRES一T載體轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜.........................................................……,.364
17、.3.1遺傳轉(zhuǎn)化.............................................……,...................................................……364.3.2不同因素對(duì)玻璃化現(xiàn)象的影響研究分析.....................................................……364.4轉(zhuǎn)基因再生植株分子檢測(cè)與性狀鑒定...........
18、.......................................................……384.4.1Basta復(fù)檢結(jié)果...........................................................................................……384.4.2組織化學(xué)染色檢測(cè)GUS活性..................................
19、....................................……394.4.3再生植株的PCR檢測(cè)....................................................................……,‘.……404.44再生植株丁:種籽粒色性狀考察.................................................................……,42
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