甘藍型油菜溶血磷脂?；D(zhuǎn)移酶家族基因的克隆與表達.pdf

1、油菜是中國乃至全球最重要油料作物之一，提高種子含油量和改善品質(zhì)是油菜研究的熱點課題。發(fā)掘脂肪酸合成與積累方面的關鍵基因?qū)⒂兄谔岣叻N子含油量和品質(zhì)的研究。
　　本課題以甘藍型油菜高含油量品種為材料，從發(fā)育中的種子中分離出了與油脂代謝相關的基因溶血磷脂酸?；D(zhuǎn)移酶(lysophosphatidic acid acyltransferase, LPAT)?？偣搏@得了LPAT基因的11個同源基因，分別命名為：BnLPAT1-LP2.2、

2、BnLPAT1-LP4.3、BnLPAT1-LP5.3、BnLPAT1-LP5.4、BnLPAT2-A7、BnLPAT2-A9、BnLPAT2-C7、BnLPAT2-C8、BnLPAT3、BnLPAT4.2、BnLPAT5.2。其中，BnLPAT1四個拷貝屬于質(zhì)體型LPAT，定位在葉綠體；其他拷貝基因?qū)儆谖⒘ｓw型LPAT均定位與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。體外活性驗證試驗表明，質(zhì)體型 LPAT在大腸桿菌中具有?；D(zhuǎn)移酶活性。BnLPAT1、BnLPAT2和

3、BnLPAT5.2在發(fā)育的種子中隨種子的發(fā)育而表達量上升。將上述基因在擬南芥中超量表達發(fā)現(xiàn)，BnLPAT2-A7、BnLPAT2-C7、BnLPAT2-C8轉(zhuǎn)基因株系種子亞麻酸含量相對于野生型提高了30％。BnLPAT2-A9超表達株系亞麻酸含量提高不明顯，這與其他三個拷貝基因差異較大，同一基因的不同拷貝功能表現(xiàn)出了較大差異。BnLPAT4.2超表達株系種子油酸含量相對于野生型提高了15%，二十碳一烯酸有所下降。BnLPAT5.2超表達

4、株系含油量與野生型相比提高了5%且萌發(fā)率不受影響。本研究結果將對提高油脂以及亞麻酸合成積累具有重要意義。
　　本課題主要成果與發(fā)現(xiàn)如下：
　　1.首創(chuàng)了InGate載體構建新方法，并利用紅色熒光蛋白進行轉(zhuǎn)基因擬南芥的拷貝數(shù)篩選，提高了實驗效率，大大提高了實驗效率。
　　2.發(fā)現(xiàn)BnLPAT2基因能夠顯著提高亞麻酸在種子油脂中的比例。
　　3.發(fā)現(xiàn)BnLPAT4.2在擬南芥中超表達提高油酸含量。
　　4.發(fā)現(xiàn)