OIE標準布魯氏菌ELISA和PCR檢測方法在奶牛奶樣中的應用研究.pdf

1、布魯氏菌病(以下簡稱布病)是由布魯氏菌(Brucella)引起的人畜共患病,在世界范圍內(nèi)導致巨大的經(jīng)濟損失,布魯氏菌是該病病原。隨著個體養(yǎng)牛戶的增加,奶牛布病的疫情呈逐年上升趨勢,同時由于布病也可傳染給人,從而給人類公共衛(wèi)生安全造成了嚴重隱患,因此采取一切措施防治牛布病刻不容緩。
　　 為探討以牛奶為材料檢測奶牛布魯氏菌感染的可行性,本研究在不同牛場收集檢測樣品包括奶液和血清。試驗中首先選用奶液間接ELISA(M-I-ELISA

2、)進行篩選,隨后結(jié)合間接ELISA做進一步的實驗室診斷,最終采用競爭ELISA對被檢樣品進行確診。結(jié)果顯示,Milk-I-ELISA與I-ELISA、C-ELISA具有較高的一致性。Milk-I-ELISA不僅能夠檢測個體奶樣還可以檢測混合奶樣。本試驗中,Milk-I-ELISA檢測混合奶樣的靈敏度高,在臨床檢測過程中與血清檢測結(jié)果保持一致,適合牛群布病感染情況的監(jiān)測,能夠第一時間做出早期診斷。
　　 本研究還建立了可鑒定布魯氏

3、菌屬的單重PCR以及鑒定布魯氏菌種的多重PCR。單重PCR以BCSP31為布魯氏菌屬特異性靶基因為基礎,多重PCR的建立方法是以擴增布魯氏菌長度多態(tài)性基因IS711為基礎。結(jié)果顯示,單重PCR方法的特異性強只特異性的擴增布魯氏菌DNA,對照菌株大腸桿菌、牛敗血性波氏桿菌、根瘤農(nóng)桿菌和蒼白桿菌等的擴增結(jié)果均為陰性:靈敏度高,奶液中細菌檢測靈敏度為1.08×104CFU/mL;用建立的多重PCR對7株不同種來源的布魯氏菌體和基因組進行鑒定,