快速檢測試劑條、鏡檢和PCR在瘧疾診斷中的應用研究.pdf

1、目的:采用鏡檢、RDT和PCR三種檢測方法對網報瘧疾病例復核檢測,比較三種方法在瘧疾診斷中的敏感性、特異性,為科學地分析判斷復核檢測結果,以及RDT能否在基層替代瘧原蟲鏡檢提供依據。RDT檢測時,同時使用進口和國產RDT兩種產品進行檢測,通過比較兩種產品的敏感性、特異性,為監(jiān)測工作中產品選擇的可行性提供依據。動態(tài)觀察瘧疾病例鏡檢、PCR和RDT的檢測陰轉時間,以及經治療后瘧疾病人鏡檢原蟲的密度隨時間的變化,為瘧疾監(jiān)測和防治工作提供科學的

2、理論依據。
　　方法:收集安徽省2012年1月~2013年9月中國疾病預防控制信息傳染病報告系統(tǒng)的網報267例瘧疾病例的血片、抗凝血,病例報告類型包括實驗室、臨床和疑似三種;50例非瘧疾病人血樣,來自芙蓉社區(qū)衛(wèi)生服務中心。267例流行病學調查表來自寄生蟲病防治信息管理系統(tǒng)。對血片和抗凝血分別進行鏡檢、RDT和PCR檢測,并將快速檢測試劑條的結果與鏡檢法和PCR的結果對比分析其敏感性與特異性。收集安徽省立醫(yī)院及肥東縣人民醫(yī)院2013

3、年5月~2013年9月瘧疾住院病人37例,確診后連續(xù)采血7天,若病人治愈出院、轉院等情況,以鏡檢與PCR結果有轉陰時間為標準,納入研究范圍。使用EDTA管采集血樣,并對病人進行流行病學調查。每天采血后立即涂制血片,同時做RDT,并提取DNA準備做PCR。采用三種方法進行檢測,觀察不同檢測方法的陰轉時間,經SPSS11.5軟件統(tǒng)計分析,采用非參數(shù)檢驗(nonparametric tests)中的Wilcoxon檢驗比較,P<0.05認為差

4、異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:收集267例網報病例的血片,鏡檢復核瘧原蟲陽性148例,陽性率為55.43％,其中惡性瘧117例,間日瘧20例,卵形瘧10例,三日瘧1例;267例抗凝血樣采用PCR法檢測,瘧原蟲陽性者150例,陽性率為56.18%,其中惡性瘧119例(包括鏡檢檢出的117例),間日瘧20例,卵形瘧10例,三日瘧1例;采用進口RDT試劑對267份抗凝血血樣進行檢測,檢測出147例陽性,陽性率為55.06%,其中非惡性瘧2

5、1例(包括鏡檢和PCR均檢為間日瘧的19例和鏡檢和PCR均檢為惡性瘧的2例),惡性瘧126例(包括鏡檢為惡性瘧的114例,另12例鏡檢陰性;PCR檢為惡性瘧116例,另10例PCR檢為陰性),因此,RDT未檢出1例間日瘧和1例惡性瘧,并將2例惡性瘧檢為非惡性瘧,10例PCR和鏡檢均檢為陰性的病例檢為惡性瘧,10例卵形瘧和1例三日瘧均未檢出;50例非瘧疾病人RDT、鏡檢和PCR檢測均為陰性。以鏡檢為標準,對間日瘧和惡性瘧進行分析得出,RD

6、T的敏感度為98%,特異度90%,假陽性率10%,假陰性率2%,陽性預測值92%,陰性預測值98%;以PCR為標準,對間日瘧和惡性瘧進行分析得出,RDT的敏感度為98%,特異度91%,假陽性率9%,假陰性率2%,陽性預測值93%,陰性預測值98%。采用國產RDT檢測結果為陽性143例,陰性124例,其中非惡性瘧18例,惡性瘧125例(包括進口RDT檢為惡性瘧的123例,另2例進口RDT檢為非惡性瘧,但是鏡檢和PCR均檢為惡性瘧)。因此,

7、國產RDT未檢出3例惡性瘧和1例間日瘧,卵形瘧和三日瘧均未檢出。將國產RDT的檢測結果與進口RDT結果進行比較,兩方法配對卡方檢驗結果表明兩方法差異沒有統(tǒng)計學意義(2=4.000,P>0.05),Kappa檢驗結果P<0.001,且Kappa值0.97,提示兩方法高度一致。動態(tài)采集37例確診瘧疾病人血樣,鏡檢轉陰時間1～5天,中位數(shù)為2天;PCR轉陰時間1～6天,中位數(shù)為3天,經非參數(shù)檢驗(nonparametric tests)中的W

8、ilcoxon檢驗比較,差異有統(tǒng)計學意義(Z=3.776,P<0.05),PCR轉陰時間約比鏡檢長1天;RDT的陰轉時間長于7天。37例病例鏡檢結果轉陰時間為1～5天不等,16例病人第二天即轉陰,其中1天后陰轉病例密度中位數(shù)為3571/μl血(267/μl血,38790/μl血),2～5天后陰轉病例密度中位數(shù)分別為第1天38385/μl血、第2天11456/μl血及第3天147/μl血,呈下降趨勢。
　　結論:本研究結果表明,課題

9、使用RDT產品無法檢出卵形瘧和三日瘧;對于惡性瘧和間日瘧,RDT與鏡檢和PCR相比,RDT的敏感性和特異性均較高。由于PCR在基層較難普及,而鏡檢對技術的要求較高而且人員培訓周期長等原因,RDT有望在基層取代鏡檢進行瘧疾監(jiān)測。國產RDT敏感性和特異性也較高,可以在基層取代進口 RDT進行瘧疾病例監(jiān)測工作。三種方法RDT的有效檢測時間最長,長于7天,PCR次之,約為3天,鏡檢陰轉時間約為2天,PCR陰轉時間一般比鏡檢遲1天,為瘧疾病例復核