鞣花酸對HEK-293細胞的DNA損傷毒性作用以及可能的氧化應激、溶酶體膜通透機制研究.pdf

1、目的:
　　 鞣花酸(Ellagicacid，EA)，是廣泛存在于各種具有軟果或堅果的植物組織中的一種天然多酚成分。多項研究結(jié)果表明，EA具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎、抗細胞增殖、抗菌和抗病毒等生物學作用，同時已有研究報道EA具有DNA損傷活性。本研究通過觀察EA致HEK-293細胞DNA損傷，探討EA對DNA損傷可能的毒性機制（氧化應激和溶酶體膜通透），為評估EA對人類的健康影響提供試驗及理論依據(jù)。
　　 方法:
　

2、　 以HEK-293細胞作為試驗系統(tǒng)。通過單細胞凝膠電泳試驗檢測EA引起體外HEK-293細胞的DNA損傷，評價EA的DNA損傷毒性。為探討其可能的DNA損傷機制，以2'，7'—二氫二氯熒光素(DCFH)和苯二醛(OPT)分別測定細胞內(nèi)活性氧(ROS)以及還原性谷胱甘肽(GSH)水平，以免疫組化方法檢測細胞內(nèi)8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)的表達水平，以吖啶橙(AO)和羅丹明123(Rhodamine123)分別測定細胞內(nèi)溶酶體膜穩(wěn)定

3、性和線粒體膜電位的改變水平，通過N-乙酰半胱氨酸(NAC)干預試驗觀察氧化性損傷對DNA損傷的影響，通過氯化銨(NH4Cl)干預試驗觀察溶酶體膜穩(wěn)定性對DNA損傷的影響，通過地昔帕明（desipramine，酸性神經(jīng)鞘磷脂酶的抑制劑）和抑胃肽（pepstainA，組織蛋白酶D的抑制劑）干預試驗觀察溶酶體內(nèi)酸性水解酶對DNA損傷的影響。試驗結(jié)果用SPSSvl1.5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。
　　 結(jié)果:
　　 EA(120μM

4、)作用于HEK-293細胞1小時后，引起DNA鏈斷裂，細胞成彗星樣拖尾，與DMSO空白對照組比其尾長明顯增長，尾DNA％增大;同時，EA（60μM-120μM）作用于HEK-293細胞3h后，可致細胞內(nèi)8-OHdG的表達水平升高;EA(120μM)作用于HEK-293細胞1小時后，細胞內(nèi)ROS生成增加、GSH水平下降;EA（30μM-120μM）作用于HEK-293細胞1小時后，細胞內(nèi)溶酶體膜穩(wěn)定性下降，線粒體膜電位水平變化不明顯。用N

5、H4Cl、NAC、地昔帕明和抑胃肽四種干預劑預處理后，EA引起的DNA鏈斷裂、細胞內(nèi)ROS以及溶酶體膜通透都有明顯地減弱，說明上述四種干預劑的保護作用十分顯著。
　　 結(jié)論:
　　 高濃度EA能夠引起細胞DNA損傷，對HEK-293細胞具有DNA損傷毒性。EA可引起HEK-293細胞內(nèi)ROS生成增加，細胞內(nèi)抗氧化物質(zhì)GSH減少，使細胞處于氧化應激狀態(tài)，并使HEK-293細胞內(nèi)氧化性DNA損傷標志性產(chǎn)物8-OHdG表達增強