鄰苯二甲酸(2-乙基已基)酯對(duì)HEK293細(xì)胞氧化應(yīng)激性DNA損傷作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的:鄰苯二甲酸(2-乙基己基)酯（DEHP）是鄰苯二甲酸酯類(lèi)化合物中應(yīng)用最廣的一種，是塑化劑的主要品種。人們可從皮膚、呼吸、口服以及醫(yī)療設(shè)備的靜脈注射等途徑接觸到DEHP，并且已有報(bào)道DEHP的細(xì)胞毒性、免疫毒性、遺傳毒性、生殖毒性。本研究通過(guò)觀察DEHP誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞引起的DNA鏈斷裂，以及ROS的產(chǎn)生、GSH的耗竭、溶酶體膜通透性和線粒體膜通透性的改變，旨在探討DEHP對(duì)DNA損傷的可能毒性機(jī)制，為進(jìn)一步評(píng)估DEHP對(duì)人類(lèi)的

2、健康影響提供試驗(yàn)及理論依據(jù)。另探究DEHP和乙醇的聯(lián)合處理是否可增加這2種毒物腎損傷程度。
　　方法:以HEK293細(xì)胞作為試驗(yàn)系統(tǒng)。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)(SCGE)檢測(cè)DEHP對(duì)體外HEK293細(xì)胞DNA損傷情況，從而驗(yàn)證DEHP的DNA損傷毒性。為進(jìn)一步探討其可能的DNA損傷機(jī)制，以2'，7'-二氫二氯熒光素(DCFH)、苯二醛(OPT)、吖啶橙(AO)、羅丹明123（rhodamine123）分別測(cè)定DEHP對(duì)細(xì)胞內(nèi)

3、活性氧(ROS)、細(xì)胞內(nèi)GSH水平、溶酶體膜穩(wěn)定性以及線粒體膜穩(wěn)定性的影響，通過(guò)N-乙酰半胱氨酸(NAC)和DL-甲硫氨酸磺酰亞胺(BSO)干預(yù)試驗(yàn)觀察氧化性損傷在DNA損傷中的作用。DEHP和乙醇的聯(lián)合作用試驗(yàn)的損傷機(jī)制以2'，7'-二氫二氯熒光素(DCFH)、OPT對(duì)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)、細(xì)胞內(nèi)GSH水平觀察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS v17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:當(dāng)DEHP作用于HEK293細(xì)胞1h后，彗星試驗(yàn)顯示

4、DEHP能引起DNA雙鏈斷裂，在熒光顯微鏡下與對(duì)照組相比，細(xì)胞成彗星樣拖尾，而且濃度越大拖尾現(xiàn)象越明顯，其中包括尾長(zhǎng)的增長(zhǎng)，尾DNA％以及DNA％含量明顯增大;同時(shí)，DEHP可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ROS的表達(dá)水平升高，GSH的水平下降，溶酶體膜穩(wěn)定性下降，線粒體膜穩(wěn)定性下降。用NAC干預(yù)1h處理后，DEHP所引起的HEK293細(xì)胞的DNA鏈的斷裂、細(xì)胞內(nèi)ROS都有明顯地減弱。用BSO干預(yù)20h處理后，DEHP所引起的HEK293細(xì)胞的DNA鏈的斷

5、裂、細(xì)胞內(nèi)ROS、GSH都有明顯地加強(qiáng)。在DEHP和乙醇的聯(lián)合作用中，彗星實(shí)驗(yàn)細(xì)胞損傷程度加劇;細(xì)胞內(nèi)ROS的表達(dá)水平升高，GSH的水平下降，較單獨(dú)染毒處理組有顯著性差異。
　　結(jié)論:DEHP能引起HEK293細(xì)胞的DNA損傷，說(shuō)明DEHP具有遺傳毒性，同時(shí)，DEHP可導(dǎo)致HEK293細(xì)胞內(nèi)ROS生成增加、GSH的遏制，使細(xì)胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，并使溶酶體膜穩(wěn)定性和線粒體膜穩(wěn)定性下降。而抗氧化劑NAC在降低了細(xì)胞內(nèi)ROS水平的同時(shí)，