鄰苯二甲酸酯對胰島β細胞氧化應(yīng)激性DNA損傷機制探討.pdf

1、目的:鄰苯二甲酸(2-乙基己基)酯(Di-(2-ethylhexyl)Phthalate，DEHP)，是使用最廣泛的增塑劑，常用于玩具、醫(yī)療器械、建材、食品包裝等。DEHP結(jié)構(gòu)松散易于浸出，人類接觸途徑廣泛。目前已有的研究結(jié)果表明，DEHP暴露會影響機體營養(yǎng)代謝狀態(tài)。相關(guān)學(xué)者發(fā)現(xiàn)鄰苯二甲酸鹽與胰島素抵抗相關(guān)，且證實DEHP通過氧化應(yīng)激引起胰島素抵抗。酒精會損害消化、神經(jīng)、內(nèi)分泌、循環(huán)系統(tǒng)，其毒性與氧化應(yīng)激相關(guān)。吡咯喹啉醌(Pyrrolo

2、quinoline quinone，PQQ)，可通過活性氧清除與線粒體相關(guān)的細胞信號途徑有效發(fā)揮有抗氧化作用。本研究選取大鼠胰島細胞(Ins-1)作為研究對象，探討DEHP對Ins-1細胞的毒性作用，并探究與此毒性相關(guān)的分子機制。同時探究酒精和PQQ對此毒性的影響。
　　方法:本試驗選取Ins-1細胞作為研究對象。采用MTT法評估各個濃度DEHP對大鼠胰島細胞Ins-1活性的影響;選用單細胞凝膠電泳試驗(SCGE)觀察、檢測DEH

3、P對Ins-1細胞DNA的損傷程度;用RT-PCR試驗方法檢測與DNA損傷相關(guān)的兩個基因p53、ATM基因的表達水平。為探討DNA損傷相關(guān)的潛在機制，選用羅丹明123(rhodamine123)、苯二醛(OPT)、2'，7'-二氯二氫熒光素?zé)晒馊玖?DCFH-DA)、3,6-雙(二甲基氨基)吖啶氯化鋅鹽酸鹽(吖啶橙，AO)作為探針，并選熒光分光光度計分別測定DEHP對Ins-1細胞的線粒體膜穩(wěn)定性、細胞內(nèi)還原性谷胱甘肽(GSH)水平、細

4、胞內(nèi)活性氧(ROS)以及細胞溶酶體膜穩(wěn)定性的影響。通過PQQ與DEHP共同作用于Ins-1細胞檢測PQQ在DEHP誘導(dǎo)Ins-1細胞氧化性損傷中的作用。同時基于以上試驗方法檢測DEHP和乙醇聯(lián)合作用損傷Ins-1細胞的機制。選用SPSS19.0對試驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果:DEHP處理Ins-1細胞1h后，觀察分析發(fā)現(xiàn)DEHP能引起Ins-1細胞出現(xiàn)彗星樣拖尾，且拖尾現(xiàn)象隨DEHP濃度的增大而愈加明顯。與對照組相比，DEH

5、P處理組的尾長、尾部DNA/頭部DNA(％)和尾距均明顯增大，且差異有顯著性。另外，DEHP可引起細胞內(nèi)還原性谷胱甘肽GSH水平下降，活性氧ROS的量增多，溶酶體和線粒體的膜穩(wěn)定性均有不同程度下降。和DEHP單獨作用相比，PQQ和DEHP共同作用所誘導(dǎo)的Ins-1細胞的DNA鏈斷裂程度減輕、細胞內(nèi)ROS的量明顯降低、細胞內(nèi)GSH水平有所升高、細胞溶酶體和線粒體的膜穩(wěn)定性均增加。在DEHP和乙醇的聯(lián)合作用，Ins-1細胞彗星樣拖尾明顯加劇

6、、細胞內(nèi)ROS量明顯地增加、細胞內(nèi)GSH水平有所降低、細胞的溶酶體和線粒體膜穩(wěn)定性均降低。
　　結(jié)論:氧化應(yīng)激是DEHP對Ins-1細胞遺傳毒性的發(fā)生機制。同時，溶酶體-線粒體途徑在DEHP誘導(dǎo)Ins-1細胞基因毒性的過程中起著十分重要的作用。PQQ可以通過清除細胞內(nèi)ROS、減少GSH耗竭兩種方式來減輕細胞應(yīng)激狀態(tài)，并降低溶酶體、線粒體膜穩(wěn)定性下降程度，從而對DEHP誘發(fā)的Ins-1損傷起到保護作用。乙醇通過加強細胞氧化應(yīng)激狀態(tài)(