塑化劑鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯的免疫分析方法研究.pdf

1、鄰苯二甲酸酯類(lèi)(PAEs)作為重要的環(huán)境激素之一,主要用作增塑劑添加到聚氯乙烯產(chǎn)品中,可以增強(qiáng)塑料的彈性、韌性、透明度和耐用性。2011年的臺(tái)灣塑化劑事件引起了人們對(duì)鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)強(qiáng)烈的關(guān)注。DEHP是最常用的鄰苯二甲酸酯類(lèi)增塑劑,它的毒性強(qiáng),對(duì)生物體的健康(尤其是生殖健康)會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重危害。
　　目前對(duì)于鄰苯二甲酸酯的檢測(cè)分析常用氣相色譜和液相色譜法。這類(lèi)方法對(duì)于鄰苯二甲酸酯的檢測(cè)分析已經(jīng)比較純熟,但是色

2、譜技術(shù)需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理,過(guò)程復(fù)雜,操作費(fèi)時(shí),而且分析成本相對(duì)昂貴。免疫分析技術(shù)特異性好,靈敏度高,操作簡(jiǎn)便,檢測(cè)限低,不用對(duì)樣品進(jìn)行復(fù)雜的預(yù)處理。對(duì)于DEHP免疫分析報(bào)道目前還很少。本文研究的目標(biāo)是建立測(cè)定DEHP的簡(jiǎn)單、快速、靈敏的免疫分析方法。本論文的工作主要有如下幾個(gè)方面:
　　1.DEHP多克隆抗體的制備
　　用重氮化法將BSA載體連接到半抗原4-氨基鄰苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHAP)上得到了免疫全抗原

3、DEHAP-BSA,然后用免疫抗原免疫大白兔,3個(gè)月后,采集血樣,得到了DEHP的多克隆抗體,測(cè)得抗體終點(diǎn)效價(jià)為1:64,000,結(jié)果令人滿意,并用飽和硫酸銨法純化抗血清得到純化抗體濃度為40 mg/mL。
　　2.間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法測(cè)定DEHP
　　首先優(yōu)化了ELIS A的實(shí)驗(yàn)條件,如包被抗原和DEHP抗體的濃度,反應(yīng)時(shí)間,封閉液濃度,稀釋液的pH值和濃度,酶標(biāo)二抗?jié)舛?以及標(biāo)準(zhǔn)液溶劑的選擇。在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下,采用制備的抗

4、 DEHP多克隆抗體建立了間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析DEHP的方法。繪制了標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性擬合后,得到方程式為A=0.778-0.0523lgC(A為吸光值, C為DEHP的濃度,單位為ng/mL),相關(guān)系數(shù)R2為0.984,線性范圍為0.01-1,000 n g/m L,檢測(cè)限為0.01 ng/m L。通過(guò)對(duì)實(shí)際水樣的測(cè)定,計(jì)算出樣品回收率為86.0％-113.0%。
　　3.直接競(jìng)爭(zhēng)熒光免疫法檢測(cè)DEHP
　　首先將FITC和D