鄰苯二甲酸酯類塑化劑免疫檢測(cè)方法的研究.pdf

1、針對(duì)鄰苯二甲酸酯類（PAEs）塑化劑污染食品的問(wèn)題，本論文對(duì)鄰苯二甲酸酯類污染物開(kāi)展了免疫檢測(cè)方法的研究。
　　針對(duì)鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)，以4-硝基鄰苯二甲酸二甲酯為原料，將硝基還原為氨基，制備半抗原4-氨基鄰苯二甲酸二甲酯(4-DMAP)。利用重氮化法將半抗原與牛血清蛋白(BSA)偶聯(lián)制備免疫原4-DMAP-BSA。利用戊二醛法將半抗原與雞卵白蛋白(OVA)偶聯(lián)制備包被原4-DMAP-OVA。用免疫原4-DMAP-BSA共

2、免疫4只新西蘭大耳白兔制備鄰苯二甲酸二甲酯抗血清，最佳抗血清是由No.2兔子產(chǎn)生，抗血清效價(jià)為1∶256000，1000 ng/mL鄰苯二甲酸二甲酯的抑制率為85.23％。通過(guò)對(duì)方法工作條件的優(yōu)化，最終確定包被量為0.03μg/well，抗體稀釋度為1∶4000，封閉液為0.5％乳粉/PBS，樣品稀釋液為pH7.4、0.01 M的PBS。最佳工作條件下建立間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA，方法靈敏度IC50值為23.31±2.62 ng/mL;檢出限

3、IC15值為2.01±0.33ng/mL。該方法與其它17種鄰苯二甲酸二甲酯結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率均低于0.1％。選擇白酒、蔬菜和飲料共十個(gè)樣品(經(jīng)GC-MS方法檢測(cè)，樣品中鄰苯二甲酸二甲酯的含量為0 ng/g(ng/mL)）進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，添加水平分別為100 ng/g(ng/mL)、500ng/g(ng/mL)和5000 ng/g(ng/mL)，應(yīng)用所建立的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)，回收率在84.90％-119.17％之間，且日

4、內(nèi)和日間的變異系數(shù)(n=3)均小于15％，ELISA方法的檢測(cè)結(jié)果與GC-MS的檢測(cè)結(jié)果具有良好一致性(R2=0.977)，說(shuō)明方法具有很好的準(zhǔn)確性，可以用于食品樣品中鄰苯二甲酸二甲酯的快速檢測(cè)。
　　針對(duì)鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(DCHP)，以4-氨基鄰苯二甲酸為原料，通過(guò)與環(huán)己醇發(fā)生酯化反應(yīng)制備半抗原4-氨基鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(4-DCHAP)。利用重氮化法制備免疫原4-DCHAP-KLH和4-DCHAP-BSA，利用戊二醛法制備免

5、疫原4-DCHAP-BSA和包被原4-DCHAP-OVA。三種免疫原共免疫6只新西蘭大耳白兔制備鄰苯二甲酸二環(huán)己酯抗血清。最佳抗血清是由免疫原4-DCHAP-KLH免疫得到的No.6兔子產(chǎn)生，效價(jià)為1∶16000，1000 ng/mL鄰苯二甲酸二環(huán)己酯的抑制率為95.88％。通過(guò)對(duì)方法工作條件的優(yōu)化，最終確定包被量為0.30μg/well，抗體稀釋度1∶1500。最佳工作條件下建立間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA，方法靈敏度IC50為211.27±1