n-3脂肪酸對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的作用及其分子機(jī)制.pdf

1、本課題利用SH-SY5Y細(xì)胞作為模型研究n-3多不飽和脂肪酸（n-3 PUFAs）對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的作用及相關(guān)分子機(jī)制。研究采用終濃度為60μmol的n-3 PUFAs預(yù)處理細(xì)胞24小時(shí)后，再以終濃度為500μM的過氧化氫處理細(xì)胞一定時(shí)間。用Hoechst染色檢測細(xì)胞凋亡、用Western blot和RT-PCR方法研究線粒體凋亡通路中 Bcl-2家族蛋白的表達(dá)、MAPK抗凋亡信號通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)、Nrf-2-ARE抗氧化應(yīng)

2、激通中下游目的基因HO-1的表達(dá)。用相應(yīng)試劑盒檢測線粒體膜電位（MMP）的喪失、活性氧（ROS）的生成。
　　研究結(jié)果表明，經(jīng)過500μM過氧化氫處理24h后，SH-SY5Y細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的細(xì)胞凋亡，60μmol n-3 PUFAs預(yù)處理能顯著抑制這種凋亡現(xiàn)象。對細(xì)胞凋亡信號通路的Bcl-2家族相關(guān)蛋白表達(dá)的研究發(fā)現(xiàn)，n-3 PUFAs預(yù)處理的細(xì)胞能夠顯著降低過氧化氫引起的促凋亡蛋白Bax、Bak表達(dá)增加；抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)降

3、低的現(xiàn)象。過氧化氫刺激導(dǎo)致細(xì)胞正常MMP喪失、細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著上升，而n-3 PUFAs預(yù)處理的細(xì)胞能維持正常MMP，保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激下的線粒體損傷和顯著抑制ROS水平的升高。MAPK抗凋亡信號通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，n-3 PUFAs預(yù)處理的細(xì)胞能夠顯著降低過氧化氫引起的細(xì)胞內(nèi)Erk蛋白磷酸化水平上升，緩解細(xì)胞抵御氧化應(yīng)激壓力，而對p38的磷酸化調(diào)控作用不顯著。在對HO-1基因表達(dá)研究中，RT-PCR結(jié)果顯示細(xì)胞內(nèi)該基因