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文檔簡介
1、本文研究了飼料中添加n-3高不飽和脂肪酸對黑鯛幼魚生長、體組成及血漿生化指標的影響,并由此得出黑鯛幼魚達到最佳增重時對飼料中n-3 HUFA%及DHA/EPA的需要量,進而通過研究組織中主要生酯酶(FAS)及主要脂解酶(HSL)的活性及基因表達來初步探討飼料n-3 HUFA調(diào)控黑鯛脂肪代謝的主要機理。研究內(nèi)容包括:(1)飼料中添加不同水平n-3 HUFA對黑鯛幼魚生長及體組成的影響;(2)飼料中DHA/EPA比值對黑鯛幼魚生長及體組成的
2、影響;(3)黑鯛FAS及HSL基因克隆及序列分析;(4)飼料n-3 HUFA含量及DHA/EPA比值對黑鯛幼魚脂肪代謝相關(guān)酶活性及基因表達的影響。
(1)選取平均體重為(8.08±0.09)g、健康、體質(zhì)均勻的黑鯛幼魚360尾,隨機放養(yǎng)入18個水泥池中搭建的網(wǎng)箱中。通過用魚油和玉米油調(diào)和脂肪酸含量,將試驗飼料配制成n-3 HUFA含量分別為0.79,0.83,0.85,0.88,0.92,0.94%,DHA/EPA比值固定
3、(2.8/1)的試驗飼料,隨機分配給六組,每組三個重復。每天投餌時間為8:00和16:00,以眼觀飽食(投餌率3~5%)為準,試驗條件同上。八周飼養(yǎng)試驗結(jié)束后,對黑鯛幼魚生長性能、飼料效率,蛋白質(zhì)效率等指標進行測定,并分析體組織常規(guī)成分組成及肝臟、肌肉和腹腔脂肪組織脂肪酸組成及血漿生化指標的變化。試驗結(jié)果表明,黑鯛脂肪細胞直徑呈減小趨勢,n-3 HUFA水平最高組顯著小于試驗組3。肌肉脂肪含量受n-3 HUFA的顯著影響,且在第四組時達
4、到最低;黑鯛幼魚全魚組織常規(guī)營養(yǎng)成分含量在各組之間差異不顯著。肝臟、肌肉及腹腔脂肪組織中∑SFA和16:0均隨飼料n-3 HUFA水平的增加里下降趨勢,∑n-3 HUFA呈顯著上升趨勢。各組織中DHA/EPA比值不受飼料脂肪酸的影響。黑鯛幼魚血漿甘油三酯和膽固醇含量隨飼料中n-3 HUFA的添加有下降趨勢。以增重率為參考指標,在本試驗條件下.黑鯛幼魚[(8.08±0.O9)g]獲得最佳增重時對飼料中n-3 HUFA的需要量為0.87%
5、DM,即8.7 g/kg飼料干物質(zhì)。
(2)選取平均體重為(11.01±0.02)g的黑鯛幼魚420尾,在與試驗一相同的條件下研究n-3 HUFA含量一定,DHA/EPA.比值不同(1.98,2.20,2.46,2.88,3.15,3.57,4.04)的試驗飼料對黑鯛幼魚生長性能、飼料效率、蛋白質(zhì)效率,體組織營養(yǎng)組成及血漿生化指標的影響。試驗結(jié)果表明,與DHA/EPA最低組相比,黑鯛幼魚腹脂率(IPF raTiO2有明顯減
6、少,并在試驗組3時達到最低。脂肪細胞直徑隨飼料DHA/EPA比值的變化趨勢不明顯,但在試驗組5,6時顯著低于其它各組。試驗結(jié)束后對試驗魚體組織營養(yǎng)成分進行分析。結(jié)果顯示,肌肉脂肪含量在飼料DHA/EPA>2.46時有顯著降低,降幅約為8.59%。全魚組織脂肪沉積量在飼料DHA/EPA>3.15時顯著減少,最大降幅可達28.3%。各處理組背肌和腹腔脂肪組織n-3 HUFA含量不受飼料的影響,但DHA/EPA比值隨飼料水平的增加而增加。以增
7、重率(WGR)為參考指標,二次曲線分析(y=-9.9707x2+62.696x+10.309,R2=0.9258;x,飼料DHA/EPA比值,y,WGR)表明,本試驗條件下,黑鯛幼魚(11.01±0.02g)獲得最佳增重時飼料中DHA/EPA比值為3.15。
(3)本研究克隆了黑鯛FAS和HSL基因片段,其片段長度分別為464bp和664bp,分別編碼150和221個氨基酸。BLAST比對分析結(jié)果表明,黑鯛FAS基因片段同
8、斑馬魚(Danio rerio)同源性為76%。黑鯛HSL基因片段同斑馬魚同源性為69%。本試驗對黑鯛FAS及HSL基因片段的克隆主要為以下試驗中黑鯛幼魚FAS及HSL基因表達的熒光定量分析作準備。
(4)本試驗主要通過分析組織中脂肪代謝主要酶的活性及基因表達水平,探討飼料中不同n-3 HUFA及DHA/EPA比值對黑鯛幼魚脂代謝影響的機理。對酶活的測定結(jié)果顯示,肝臟組織FAS活性較高,而腹腔脂肪(IPF)組織幾乎不能檢測
9、到該酶,說明FAS在黑鯛幼魚中的表達具有組織特異性,以肝臟為脂肪合成主要器官。FAS活性在試驗組1-4之間無顯著差異,當飼料n-3 HUFA含量在0.92%以上時開始有顯著下降。腹腔脂肪組織中HSL活性隨飼料n-3 HUFA的添加有增加趨勢,當飼料n-3 HUFA含量達到最高時(0.94%),HSL活性增加到將近一倍。飼喂不同DHA/EPA比值飼料的試驗魚肝臟組織中FAS活性不受飼料1-4的影響,隨著飼料DHA/EPA比值的進一步增加呈
10、顯著下降趨勢。脂肪組織HSL活性隨飼料DHA/EPA比值的增加有上升趨勢,但當飼料DHA/EPA大于2.88時進入平臺期,保持在0.79左右。熒光定量分析與酶活測定結(jié)果相似,同樣表現(xiàn)為FAS表達水平在試驗組4以后開始下降,而HSL隨飼料n-3 HUFA或DHA/EPA升高而上升。以上研究結(jié)果表明,飼料n-3 HUFA及DHA/EPA對黑鯛幼魚脂肪代謝影響主要是對脂肪酸合成酶(FAS)和激素敏感脂肪酶(HSL)活性及基因表達進行同步調(diào)控的
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