玻璃體內(nèi)注射用貝伐單抗PLGA緩釋微球的合成及鑒定研究.pdf

1、目的：Bevacizumab(貝伐單抗)（商品名Avastin，Genentech公司）是一種重組人VEGF單克隆全長(zhǎng)抗體，分子量149kDa，可以同VEGF的所有異構(gòu)體發(fā)生高親和力結(jié)合，間接阻斷VEGF和其受體的結(jié)合從而抑制新生血管的形成，從而抑制了新生血管的形成以及減少血管的通透性。但生物半衰期3-5天，目前臨床上需要每隔28天進(jìn)行一次玻璃體腔注藥，極大增加了發(fā)生并發(fā)癥的概率。本實(shí)驗(yàn)旨在研制玻璃體內(nèi)注射用貝伐單抗聚乳酸-羥基乙酸共聚

2、物(PLGA)緩釋微球，并鑒定其相關(guān)性質(zhì)。以期找到一種新的適用于玻璃體內(nèi)注射的貝伐單抗緩釋劑型，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，增加眼內(nèi)藥物濃度，減少重復(fù)注藥次數(shù)。
　　 方法：采用無(wú)水乳化法(S/O/hO)制備貝伐單抗-PLGA微球。然后稱(chēng)取微球20mg，用1mL二氯甲烷渦旋振蕩5min溶解，離心棄去含聚合物的上清液溶液，重復(fù)五次后然后加10mlPBS充分溶解，得貝伐單抗樣品液，ELISA測(cè)定計(jì)算待測(cè)液中貝伐單抗的濃度，計(jì)算出微球中的貝伐單

3、抗含量，得微球的載藥量和包封率，掃描電鏡(SEM)觀測(cè)其形態(tài)及粒徑。稱(chēng)取12.5mg的Bevacizumab-PLGA微球置于裝有2.5mLPBS緩沖溶液(PH=7.2)的離心管中，置于4℃冰箱中，分別在第1/2d、1d、3d、7d、14d、28d定時(shí)移去0.01mL緩釋液，并補(bǔ)充同樣體積的緩沖液，保存于離心管中并標(biāo)號(hào)凍存于-80℃冰箱待測(cè)．ELISA法測(cè)定貝伐單抗?jié)舛?，從而?jì)算出貝伐單抗微球累積釋藥率。
　　 結(jié)果：采用上述無(wú)

4、水乳化法制備的貝伐單抗-PLGA微粒大小較為均勻(粒徑2～7μm)、表面光滑圓整。整個(gè)操作過(guò)程比較簡(jiǎn)單，且添加劑具有生物兼容性，對(duì)人體沒(méi)有威脅。用酶聯(lián)免疫測(cè)定法(ELISA)測(cè)定微球的包封率約49％，載藥量約10%，該載荷貝伐單抗的微球的體外釋藥結(jié)果顯示其體外釋藥過(guò)程較為穩(wěn)定．第1天突釋貝伐單抗達(dá)到20.1%，第3天達(dá)到34.6%，第7天達(dá)到63%，從第14天起達(dá)到87%，第28d達(dá)到90%，可以認(rèn)為在14天時(shí)微球中藥物已基本徹底釋出，