陰溝腸桿菌產(chǎn) AmpC酶的表型及相關(guān)基因ampC和ampD的初步研究.pdf

1、陰溝腸桿菌(Enterobacter Cloacae，ECL)是一種常見的革蘭陰性條件致病菌，常引起呼吸道、泌尿生殖道以及傷口等的感染。近二十年來，隨著第三代、第四代頭孢菌素和免疫抑制劑等的使用及各種侵入性操作在臨床的廣泛應(yīng)用，多重耐藥革蘭陰性桿菌引起的感染備受關(guān)注，其中以陰溝腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌為主的腸桿菌屬細(xì)菌已成為醫(yī)院感染中重要的致病菌。大量研究表明，高產(chǎn)AmpCβ-內(nèi)酰胺酶(AmpC酶)是陰溝腸桿菌對青霉素類、第一至三代頭孢菌素、

2、頭霉素類和單環(huán)類耐藥的主要機制。快速、準(zhǔn)確地檢測出高產(chǎn)AmpC酶的菌株，有利于指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理使用抗菌藥物和院內(nèi)感染控制的管理。
　　 目的：①使用多底物協(xié)同-拮抗法(multi-substrates synergy-antagonize test，MSSAT)檢測陰溝腸桿菌產(chǎn)AmpC酶的表型。②對陰溝腸桿菌ampC基因、ampD基因的攜帶情況以及AmpD的氨基酸替代位點與AmpC酶表型的關(guān)系進行初步研究。
　　 方法：

3、⑴收集天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院呼吸科微生物實驗室2006年1月至2009年6月期間臨床分離的陰溝腸桿菌，全部經(jīng)生化反應(yīng)重新鑒定；使用多底物協(xié)同-拮抗法(MSSAT)檢測陰溝腸桿菌產(chǎn)AmpC酶的表型。⑵通過聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增結(jié)構(gòu)基因ampC和調(diào)節(jié)基因ampD的基因片段。不同表型的陰溝腸桿菌ampD基因的PCR擴增產(chǎn)物送DNA測序，結(jié)果與Kopp U報道的陰溝腸桿菌14的ampD基因序列(GenBank登錄號Z14003.1)進行比對，

4、分析ampD基因突變與AmpC酶表型的關(guān)系。
　　 結(jié)果：①2006年1月至2009年6月，從天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院呼吸科微生物實驗室收集的標(biāo)本中分離出陰溝腸桿菌31株。來源于呼吸科病房18株，呼吸科門診7株，ICU病房6株。采用MSSAT方法檢測顯示陰溝腸桿菌不產(chǎn)AmpC酶2株(2/31，6.5％，痰標(biāo)本1株，尿標(biāo)本1株)，產(chǎn)高誘導(dǎo)型AmpC酶15株(15/31，48.4％，痰標(biāo)本12株，尿標(biāo)本2株，咽拭子標(biāo)本1株)，產(chǎn)部分去阻

5、遏型AmpC酶9株(9/31，29.0％，均為痰標(biāo)本)，產(chǎn)完全去阻遏型AmpC酶5株(5/31，16.1％，痰標(biāo)本4株，尿標(biāo)本1株)。②31株陰溝腸桿菌的結(jié)構(gòu)基因ampC和調(diào)節(jié)基因ampD經(jīng)PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳均檢測到相應(yīng)目的片段的條帶。3株不同表型陰溝腸桿菌ampD基因片段均存在多處位點變異，對應(yīng)氨基酸的替代位點分別為高誘導(dǎo)型Asp-59→Asn，Ala-71→Arg，Leu-72→Val，Asp-75→His，Gln-103→

6、His，Thr-122→Ser，Glu-131→Gln，Lys-132→Gln，Val-136→Ile，Gln-138→His，Arg-143→Leu，Glu-160→Ala，His-175→Arg，Thr-179→Ala，Thr-180→Ala，Thr-187→Asn；部分去阻遏型Ala-71→Arg，Leu-72→Val，Asp-75→His，Gln-103→His，Ala-128→Ser，Glu-131→Gln，Lys-132→G

7、ln，Val-134→Ala，Gln-138→Arg，Arg-143→Leu，Glu-160→Ala，Ser-172→Pro，His-175→Arg，Thr-180→Ala；完全去阻遏型Ala-71→Arg，Leu-72→Val，Asp-75→His，Ala-158→Val，Ile-186→Thr。
　　 結(jié)論：⑴本研究選用陰溝腸桿菌31株，主要來源為呼吸科病房，主要標(biāo)本為痰標(biāo)本。本研究采用多底物協(xié)同-拮抗法鑒定出陰溝腸桿菌產(chǎn)A