陰溝腸桿菌耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、[目的]
　　 在明確陰溝腸桿菌耐藥現(xiàn)狀的基礎(chǔ)上，闡明整合子的流行現(xiàn)狀、分布(定位)及耐藥基因盒種類(lèi)；并進(jìn)一步探明CTX-M型ESBLs與qnr基因的流行狀況，探討整合子、CTX-M型ESBLs、qnr基因與耐藥性的關(guān)系，為合理使用抗生素，控制耐藥菌株播散提供理論依據(jù)。
　　 [方法]
　　 1.采用全自動(dòng)微生物分析儀(VITEK32)鑒定細(xì)菌。
　　 2.抗生素敏感性試驗(yàn)：采用紙片擴(kuò)散法(K-B法)測(cè)定

2、70株陰溝腸桿菌對(duì)18種抗生素的敏感性；采用瓊脂稀釋法測(cè)定70株陰溝腸桿菌對(duì)4種抗生素的最小抑菌濃度。
　　 3.PCR擴(kuò)增陰溝腸桿菌質(zhì)粒和染色體上的整合子及整合子陽(yáng)性株中的可變區(qū)耐藥基因，并做測(cè)序分析。
　　 4.PCR擴(kuò)增質(zhì)粒上的qnr基因，并做測(cè)序分析。
　　 5.采用雙紙片協(xié)同法篩選ESBLs陽(yáng)性菌株。PCR擴(kuò)增陰溝腸桿菌質(zhì)粒和染色體上的CTX-M型ESBLs基因，并做測(cè)序分析。
　　 [結(jié)果]<

3、br>　　 1.共分離出70株陰溝腸桿菌，主要的標(biāo)本來(lái)源為痰液、尿液和血液，分別占標(biāo)本來(lái)源的52.9％、17.6％和11.8％。陰溝腸桿菌對(duì)亞胺培南和美羅培南的耐藥率最低，均100％敏感，耐藥率最高的是頭孢唑林和氨芐青霉素，也均為100％，其他抗生素均表現(xiàn)出不同程度耐藥。
　　 2.70株陰溝腸桿菌中有47株檢測(cè)到Ⅰ類(lèi)整合子，陽(yáng)性率為67.14％，僅在染色體DNA中檢測(cè)到Ⅰ類(lèi)整合子的有9株，陽(yáng)性率為12.85％，占陽(yáng)性株的19

4、.15％；僅在質(zhì)粒DNA中檢測(cè)到Ⅰ類(lèi)整合子有10株，陽(yáng)性率為14.29％，占陽(yáng)性株的21.28％；同時(shí)在染色體DNA和質(zhì)粒DNA上都檢測(cè)到Ⅰ類(lèi)整合酶的有28株，陽(yáng)性率為40％，占陽(yáng)性株的59.57％。即在染色體DNA上的檢出率為52.86％(37/70)，而在質(zhì)粒上的檢出率為54.29％(38/70)。未檢測(cè)出Ⅱ類(lèi)整合子。
　　 3.頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢西丁、頭孢他啶、頭孢哌酮/舒巴坦、環(huán)丙沙星、慶大霉素和丁胺卡那在整合子陽(yáng)

5、性組中的耐藥率明顯高于整合子陰性組，耐藥率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；頭孢唑啉、哌拉西林/他唑巴坦、左旋氧氟沙星的耐藥率在兩組的差別則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.ESBLs的陽(yáng)性率為58.57％(41/70)，ESBLs陽(yáng)性菌株耐藥率整體比陰性菌株高。在產(chǎn)ESBLs的陰溝腸桿菌中，同時(shí)在染色體和質(zhì)粒DNA上、僅在染色體DNA上和僅在質(zhì)粒DNA上檢測(cè)到Ⅰ類(lèi)整合子的比例分別為56.10％、14.63％和9.76％；Ⅰ類(lèi)整合子陰性的占19.51％

6、。即在產(chǎn)ESBLs中有80.49％攜帶Ⅰ類(lèi)整合子。
　　 5.分別以Ⅰ類(lèi)整合子陽(yáng)性株質(zhì)粒DNA和染色體DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增Ⅰ類(lèi)整合子可變區(qū)，分別有45株和47株陽(yáng)性。攜帶大小不等的基因，其中有些陽(yáng)性株含有多個(gè)基因。
　　 6.本地區(qū)陰溝腸桿菌攜帶的整合子含耐氨基糖苷類(lèi)抗生素基因aadA2(攜帶率55.31％)和aadB，耐甲氧芐氨嘧啶抗生素基因dfrA12(65.96％)和dhfrⅫ，耐β-內(nèi)酰胺類(lèi)基因blaIMP

7、-4和耐氯霉素基因catB3。陰溝腸桿菌對(duì)氨基糖苷和甲氧芐氨嘧啶類(lèi)抗生素的耐藥率和耐藥基因攜帶率相對(duì)應(yīng)。
　　 7.qnr基因陽(yáng)性率為35.71％，其中，qnrA基因、qnrB基因和qnrS基因陽(yáng)性率分別為5.71％、22.86％和7.14％。qnr基因陽(yáng)性株中有88％產(chǎn)ESBLs，其中，qnrA、qnrB和qnrS陽(yáng)性株產(chǎn)ESBLs的比例分別為16％、64％和8％；qnr基因陽(yáng)性株攜帶Ⅰ類(lèi)整合子的比例為80％。qnrA、qnr

8、B和qnrS基因陽(yáng)性株中Ⅰ類(lèi)整合子陽(yáng)性的比例分別為12％、52％和16％。
　　 8.頭孢吡肟、氨曲南、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、丁胺卡那和哌拉西林/他唑巴坦在qnr基因陽(yáng)性組中的耐藥率明顯高于qnr基因陰性組，耐藥率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 9.70株陰溝腸桿菌中，有24株檢測(cè)到CTX-M型ESBls基因，陽(yáng)性率為34.29％，占ESBLs陽(yáng)性株的58.54％。CTX-M-1型酶、CTX-M-9型酶和CTX-M-

9、25型酶陽(yáng)性株分別有17株，8株和4株。有些陽(yáng)性菌株同時(shí)含幾個(gè)群或者在質(zhì)粒和染色體上同時(shí)含有一個(gè)群。CTX-M-1型酶、CTX-M-9型酶和CTX-M-25型酶陽(yáng)性株分別有47.06％、37.50％和25％攜帶Ⅰ類(lèi)整合子。
　　 10.在CTX-M型酶陽(yáng)性株中，有7株qnr基因陽(yáng)性，陽(yáng)性率為29.17％。在CTX-M-1型酶陽(yáng)性株中，含qnr基因有4株；在CTX-M-9型酶陽(yáng)性株中，含qnrB基因有2株；在同時(shí)含有CTX-M-2

10、5、CTX-M-1的陽(yáng)性株中，含qnrA基因有1株。
　　 11.頭孢噻肟、頭孢西丁、頭孢他啶、環(huán)丙沙星、諾氟沙星和復(fù)方新諾明在CTX-M型ESBLs陽(yáng)性組中的耐藥率明顯高于CTX-M型ESBLs陰性組。差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 [結(jié)論]
　　 1.陰溝腸桿菌主要引起呼吸道、尿路感染，血液感染有增加的趨勢(shì)；其多重耐藥趨勢(shì)明顯，耐藥情況嚴(yán)重。
　　 2.陰溝腸桿菌Ⅰ類(lèi)整合子陽(yáng)性株比陰性株更容易產(chǎn)生耐藥，同時(shí)

11、在質(zhì)粒和染色體上攜帶Ⅰ類(lèi)整合子的現(xiàn)象常見(jiàn)，提示耐藥基因在陰溝腸桿菌中水平播散和垂直傳播的潛力較大。
　　 3.整合子可變區(qū)攜帶的耐藥基因以耐氨基糖苷類(lèi)和耐甲氧芐氨嘧啶抗塵素基因?yàn)橹鳌?br>　　 4.本地區(qū)陰溝腸桿菌攜帶的qnr基因以qnrB基因?yàn)橹?，qnr基因陽(yáng)性株產(chǎn)ESBLs和攜帶常見(jiàn)Ⅰ類(lèi)整合子常見(jiàn)。
　　 5.本地區(qū)陰溝腸桿菌攜帶的CTX-M型ESBLs以CTX-M-1型酶為主，并主要存在染色體上。CTX-M型E