夫西地酸與磷霉素對(duì)MRSA生物被膜感染聯(lián)合效應(yīng)研究.pdf

1、目的：研究夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對(duì)196株MRSA聯(lián)合抗菌效應(yīng)。研究夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對(duì)體外MRSA生物被膜的作用.研究夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對(duì)燙傷合并MRSA生物被膜感染的大鼠的作用。研究夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對(duì)鈷60照射后燙傷合并MRSA生物被膜感染的大鼠的作用。
　　 方法：⑴采用棋盤(pán)法設(shè)計(jì),微量肉湯稀釋法測(cè)定不同濃度組合的夫西地酸與磷霉素對(duì)196 MRSA的最低抑菌濃度,并計(jì)算FIC指數(shù)、判定聯(lián)合效應(yīng),采用掃描電鏡、原子力顯

2、微鏡觀察MRSA的形態(tài)。⑵采用改良的組織培養(yǎng)平板法建立體外MRSA BBF模型,銀染法及活菌計(jì)數(shù)法初步鑒定BBF的形成,采用活菌計(jì)數(shù)法、掃描電鏡(SEM)觀察測(cè)定時(shí)間差療法夫西地酸與磷霉素對(duì)體外MRSA BBF的作用。⑶建立燙傷合并MRSA生物被膜感染的大鼠模型,通過(guò)對(duì)大鼠的生命體征、血常規(guī)、感染部位BBF菌落計(jì)數(shù)的測(cè)定以及運(yùn)用掃描電鏡觀察等方法研究磷霉素與夫西地酸聯(lián)合對(duì)燙傷合并MRSA生物被膜感染的大鼠的作用。⑷建立60Co照射后免疫

3、力低下?tīng)C傷合并MRSA生物被膜感染的大鼠模型。通過(guò)對(duì)大鼠的生命體征、血常規(guī)、感染部位BBF菌落計(jì)數(shù)測(cè)定；對(duì)大鼠骨髓病理,皮膚病理觀察以及對(duì)IL-6、CRP測(cè)定等評(píng)價(jià)磷霉素與夫西地酸聯(lián)用對(duì)免疫力低下的MRSA生物被膜感染的大鼠的作用。
　　 結(jié)果：①夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對(duì)196株MRSA藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:夫西地酸和磷霉素聯(lián)合應(yīng)用,FIC指數(shù)分布172株為≦0.5,協(xié)同百分比為87.76％)；24株表現(xiàn)無(wú)關(guān)作用(12.24％)；無(wú)拮

4、抗作用.表明夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對(duì)多數(shù)MRSA呈協(xié)同作用。②銀染法快速鑒定濃密的黑染交織分布的物質(zhì)為BBF的形成；活菌計(jì)數(shù)法測(cè)定硅膠片生物被膜菌落數(shù).建立24h未成熟的生物被膜的模型,連續(xù)給藥3天；建立7天成熟的生物被膜的模型,連續(xù)給藥5天后,各個(gè)給藥組都能減少M(fèi)RSA體外BBF內(nèi)活菌數(shù)量.夫西地酸聯(lián)合磷霉素(16/256μg/ml)比單用夫西地酸(16μg/ml)、單用磷霉素(256μg/ml)對(duì)MRSA BBF的作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

5、(p<0.05),減少大于100倍,兩者聯(lián)用比單用協(xié)同作用.掃描電鏡能夠觀察模型組形成的致密的MRSABBF,可以看到大片的球狀細(xì)菌形成菌落堆積在一起,細(xì)菌相互粘連聚集度高.夫西地酸與磷霉素聯(lián)用后未見(jiàn)粘連的小團(tuán)塊聚集狀,少量散在的球狀MRSA,少量細(xì)菌出現(xiàn)變形.夫西地酸與磷霉素聯(lián)合用藥的效果要優(yōu)于單用藥。③成功建立燙傷合并MRSA生物被膜感染的大鼠模型。造模7天時(shí),模型組大鼠白細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的值遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常對(duì)照組；造模14天

6、時(shí),磷霉素組、夫西地酸與磷霉素聯(lián)用組大鼠白細(xì)胞、單核細(xì)胞、中心粒細(xì)胞明顯低于造模大鼠組.夫西地酸與磷霉素聯(lián)用組BBF下活菌計(jì)數(shù)低于磷霉素組100倍,降低了2個(gè)數(shù)量級(jí)的菌落,提示兩者聯(lián)用有協(xié)同殺滅MRSABBF下細(xì)菌的作用。掃描電鏡下觀察燙傷合并MRSA BBF感染大鼠生物被膜為緊密包繞聚集成團(tuán),細(xì)菌與細(xì)菌之間以粘稠的粘液絲相連,細(xì)菌表面凹凸不平的模樣物質(zhì)；夫西地酸和磷霉素組掃描電鏡觀察生物被膜形態(tài),BBF密度低于磷霉素單用組,其中僅有少

7、量變形的細(xì)菌。④成功建立了鈷60照射致免疫功能低下合并燙傷后MRSA生物被膜感染的大鼠模型.大鼠在造模3天時(shí)白細(xì)胞降到了最低,造模第七天時(shí),大鼠的白細(xì)胞低于正常組.夫西地酸與磷霉素聯(lián)合給藥組的BBF下活菌數(shù)明顯低于磷霉素單用組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),減少大于100倍,兩者聯(lián)用有協(xié)同作用。在給藥7天后模型組的CRP,IL-6值遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他三組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05).夫西地酸與磷霉素聯(lián)用組大鼠的CRP、IL-6值與正

8、常組接近。造模7天和14天大鼠骨髓腔均有出血,部分細(xì)胞造血功能受損。造模7天和14天大鼠皮膚可見(jiàn)大量的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)和細(xì)菌菌落。磷霉素組中性粒細(xì)胞變形,數(shù)量減少。夫西地酸與磷霉素聯(lián)合用藥組比磷霉素單用組的皮膚中中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少。鈷60照射免疫力低下的燙傷大鼠皮膚MRSA生物被膜感染可被夫西地酸和磷霉素聯(lián)合用藥所抑制。
　　 結(jié)論：夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對(duì)體外MRSA浮游菌主要為協(xié)同作用。夫西地酸與磷霉素聯(lián)合對(duì)體外體內(nèi)MRSA