磷霉素與氨基糖苷類藥物對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜的聯(lián)合效應(yīng)及對(duì)氨基糖苷類藥物腎毒性的影響.pdf

1、目的：本課題通過(guò)研究磷霉素與氨基糖苷類藥物聯(lián)合應(yīng)用對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜體內(nèi)外的聯(lián)合效應(yīng)及對(duì)氨基糖苷類藥物腎毒性的影響，探討磷霉素對(duì)氨基糖苷類藥物在抑制銅綠假單胞菌生物被膜形成方面的增效作用及其減輕氨基糖苷類藥物腎毒性方面的作用。 方法：應(yīng)用微量肉湯稀釋法測(cè)定不同濃度組合的5組抗菌藥物(磷霉素分別與氨基糖苷類藥物組合)對(duì)銅綠假單胞菌臨床分離株(n=20)的最低抑菌濃度，并計(jì)算FIC指數(shù)判定聯(lián)合效應(yīng)；采用改良的組織培養(yǎng)平板法建立銅

2、綠假單胞菌PAO1生物被膜模型，應(yīng)用銀染法快速鑒定、掃描電鏡觀察經(jīng)不同劑量?jī)深愃幬锫?lián)合作用處理后的PAO1生物被膜超微結(jié)構(gòu)，對(duì)其形態(tài)學(xué)進(jìn)行描述；采用計(jì)算機(jī)圖像處理系統(tǒng)對(duì)銀染法快速鑒定后的硅膠片進(jìn)行圖像分析；應(yīng)用MTT活菌計(jì)數(shù)法測(cè)定不同劑量?jī)深愃幬锫?lián)合作用后的PAO1生物被膜中的存活細(xì)菌數(shù)量；采用大鼠皮下埋植組織籠法，通過(guò)對(duì)大鼠的體重、體溫、C-反應(yīng)蛋白、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、局部感染組織菌落計(jì)數(shù)、組織籠菌落計(jì)數(shù)，組織籠掃描電鏡觀察研究磷霉素與氨基

3、糖苷類藥物對(duì)大鼠體內(nèi)銅綠假單胞菌生物被膜感染的聯(lián)合效應(yīng)；并采用血肌酐、血尿素氮、尿量、尿NAG酶、腎組織病理觀察、腎組織透射觀察，評(píng)價(jià)磷霉素對(duì)氨基糖苷類藥物致大鼠腎毒性的影響。 結(jié)果：磷霉素與5種氧基糖苷類藥物聯(lián)合應(yīng)用后，兩類藥物MIC50顯著降低，F(xiàn)IC指數(shù)分布：FIC≤0.5占65％～85％；0.5＜FIC＜i占10％～20％；1＜FIC≤2為5％～15％；FIC＞2為0。銀染法快速鑒定的形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示，PAO1生物被膜上分

4、布著濃密黑染交織物質(zhì)，其間隙中聚集著短桿狀細(xì)菌體；同一劑量下，聯(lián)藥組的黑染交織物較單藥組少，表明聯(lián)藥組的抑制被膜形成作用較單藥組顯著；磷霉素+阿米卡星和磷霉素+異帕米星聯(lián)用的抑制被膜形成作用基本相似。掃描電鏡觀察顯示，PAO1菌體呈短桿狀，為濃厚的粘液樣物質(zhì)緊密包繞聚集成團(tuán)，細(xì)菌與細(xì)菌之間以粘稠的纖維狀粘液絲相連；聯(lián)藥組的抑制被膜形成作用較單藥組顯著；采用計(jì)算機(jī)圖像處理系統(tǒng)對(duì)銀染法快速鑒定后的硅膠片進(jìn)行圖像分析，平均光密度值隨著藥物的劑

5、量增大而逐漸減小，聯(lián)藥組的平均光密度值顯著低于單藥組的平均光密度值(P＜0.05)。 MTT活菌計(jì)數(shù)法結(jié)果顯示，活菌數(shù)量隨著藥物的劑量增大而逐漸減小，聯(lián)藥組的活菌數(shù)量顯著低于單藥組的活菌數(shù)量(P＜0.05)。 大鼠體內(nèi)組織籠實(shí)驗(yàn)顯示，治療72小時(shí)后聯(lián)藥組的體溫、外周血白細(xì)胞、C-反應(yīng)蛋白和體重減少量較單藥組和對(duì)照組顯著下降(P＜0.05)；單藥組較對(duì)照組下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；異帕米星組較磷霉素組下降，

6、但兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。組織勻漿菌落計(jì)數(shù)顯示聯(lián)藥組與其他組相比菌落計(jì)數(shù)顯著下降(P＜0.05)；異帕米星組和磷霉素組較對(duì)照組低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。組織籠菌落計(jì)數(shù)較細(xì)菌感染局部組織菌落計(jì)數(shù)高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。組織籠掃描電鏡觀察結(jié)果顯示，聯(lián)藥組的對(duì)生物被膜清除作用較單藥組顯著。 磷霉素對(duì)氨基糖苷類藥物致大鼠腎毒性影響的研究結(jié)果顯示，隨給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，單藥組和聯(lián)藥組的血肌酐、血尿

7、素氮及尿NAG酶水平增高。4周時(shí)聯(lián)藥組的血肌酐、血尿素氮及尿NAG酶水平與對(duì)照組相比升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而單藥組與對(duì)照組、聯(lián)藥組相比顯著升高(P＜0.05)。4周時(shí)的腎組織光鏡觀察和腎組織透射電鏡觀察顯示：磷霉素+異帕米星聯(lián)藥組的腎損害較異帕米星單藥組顯著減輕。 結(jié)論：通過(guò)以上研究發(fā)現(xiàn)磷霉素與氨基糖苷類藥物聯(lián)用對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜形成的抑制和殺菌活性具有顯著增效作用，且磷霉素可減輕氨基糖苷類藥物致腎毒性作