血根堿對細菌生物被膜的作用研究.pdf

1、抗生素作為飼料添加劑，對畜禽有保健促長作用。但是它在殺滅細菌的同時，起到篩選耐藥菌株的作用，抗生素濫用進一步促使細菌不斷的突變，甚至形成細菌生物被膜(bacterialbiofilm，BBF)，影響動物源性的食品安全。發(fā)達國家對于抗生素管理越來越嚴格，北歐甚至禁用抗生素，將獸藥殘留作為農(nóng)畜禽產(chǎn)品在國際貿(mào)易中的技術(shù)壁壘，大大限制了我國畜牧產(chǎn)品國際化進程。在我國，有46.1％的抗生素用于畜牧養(yǎng)殖，迫切需要開發(fā)新的無藥物殘留、無污染、不易產(chǎn)生

2、耐藥性并能有效清除生物被膜的綠色抗生素替代物。
　　 血根堿（Sanguinarine）在我國資源豐富，而且使用后易降解，對環(huán)境污染小，殺菌能力強，并且有可能對生物被膜有效，歐盟已有將血根堿作為飼用抗菌物質(zhì)的許多探索。因此，血根堿作為飼用添加劑的研制與開發(fā)具有非常重要的意義和廣闊的市場前景。
　　 本文分析血根堿的體外抑菌作用，構(gòu)建甲型副傷寒沙門氏菌、侵襲性大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌生物被膜，重點研究其對致病菌生物被膜

3、的影響及作用，為血根堿成為綠色的飼用抗生素替代物打下基礎(chǔ)。本研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　 (1)血根堿體外抑菌試驗。通過試管二倍稀釋法測定不同濃度的血根堿對致病菌（金黃色葡萄球菌、侵襲性大腸埃希氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌、蠟樣芽孢桿菌），非致病菌（枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌）的最低抑菌濃度;采用管碟法，研究血根堿對菌的抑制能力，并與國家允許添加的飼用抗生素鹽酸霉素比較，結(jié)果表明:隨著血根堿濃度提高，其抑菌效果逐步增加，0.32

4、g/L的血根堿抑菌效果明顯;與鹽酸金霉素抑菌效果對比發(fā)現(xiàn)，對于致病菌（金黃色葡萄球菌、侵襲性大腸埃希氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌）優(yōu)于鹽酸金霉素，而對益生菌抑制作用較小。
　　 (2)細菌生物被膜構(gòu)建。采用剛果紅平板法、銀染法定性結(jié)合結(jié)晶紫染色法對致病菌金黃色葡萄球菌、侵襲性大腸埃希氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌生物被膜鑒定和表征。結(jié)果說明成功構(gòu)建了這三種菌的生物被膜。
　　 (3)血根堿對細菌生物被膜的影響。研究血根堿對金黃色葡

5、萄球菌、侵襲性大腸埃希氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌生物被膜影響及作用。結(jié)果表明:剛果紅平板法定性觀察發(fā)現(xiàn)血根堿對沙門氏菌、侵襲性大腸埃希氏菌生物被膜影響大于鹽酸金霉素;菌落計數(shù)法定量研究，得到0.16g/L的血根堿作用后三種生物被膜上的細菌數(shù)明顯減少;血根堿作用后大大減少了甲型副傷寒沙門氏菌、侵襲性大腸埃希氏菌生物被膜上多糖含量;化學(xué)鑒定沙門氏菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌生物被膜，發(fā)現(xiàn)主要含有藻酸鹽;分光光度法測定得到血根堿作用后，藻酸鹽量