人工合成肽IDR-1018對(duì)MRSA生物被膜影響的研究.pdf

1、目的:
　　1.測定耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的生長曲線及 MRSA生物被膜生長曲線，指導(dǎo)后期實(shí)驗(yàn)中對(duì)細(xì)菌接種時(shí)間及紅霉素應(yīng)用濃度的把握。
　　2.構(gòu)建MRSA體外生物被膜模型。
　　3.探究不同濃度 IDR-1018與紅霉素對(duì) MRSA成熟生物被膜的破壞作用以及對(duì)MRSA生物被膜形成的抑制作用。
　　方法:
　　1.挑取單菌落于5ml TSB培養(yǎng)基中，37℃震蕩培養(yǎng)16h后，將細(xì)菌懸液按1:10

2、00接種于TSB培養(yǎng)基中，每2h取出200μl菌懸液于595nm處測量吸光度值，得到細(xì)菌生長曲線。
　　2.建立生物被膜模型。以聚氯乙烯（PVC）材質(zhì)的96孔板作為細(xì)菌的粘附載體，以TSB為液體培養(yǎng)基，將對(duì)數(shù)后期細(xì)菌懸液濃度調(diào)整至108CFU/ml后接種于載體上，37℃靜置培養(yǎng)，以結(jié)晶紫染色法觀察生物被膜狀態(tài)。
　　3.將 IDR-1018/紅霉素工作液（1000mg/L）于96孔板中經(jīng)二倍稀釋法稀釋為一系列不同濃度梯度的藥

3、液備用。
　　4.細(xì)菌接種24h、48h后給予不同濃度的IDR-1018和（或）紅霉素干預(yù)，繼續(xù)37℃靜置培養(yǎng)，以結(jié)晶紫染色法觀察生物被膜狀態(tài)，生理鹽水清洗后加入乙醇溶解，于595nm處測量吸光度值。
　　結(jié)果:
　　1.細(xì)菌接種至液體培養(yǎng)基中后，2～4h為生長適應(yīng)期，從第4h起已開始進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期，持續(xù)16h，隨后細(xì)菌開始進(jìn)入生長穩(wěn)定期。
　　2. PVC96孔板經(jīng)結(jié)晶紫染色可見孔壁氣液交界處一層紫色連續(xù)性片狀

4、生物被膜。
　　3.細(xì)菌接種48h后給予不同濃度IDR-1018或紅霉素干預(yù)，觀察到各濃度組的IDR-1018對(duì)成熟生物被膜產(chǎn)生了明顯的破壞作用；高濃度組（1g/L~250mg/L）的紅霉素可對(duì)成熟生物被膜起到破壞作用，低濃度組（<250mg/L）對(duì)生物被膜的破壞作用不明顯。
　　4.細(xì)菌接種24h后給予 IDR-1018或紅霉素干預(yù)，觀察到各個(gè)濃度組 IDR-1018對(duì)生物被膜形成產(chǎn)生了明顯的抑制作用，高濃度分組（1g/L

5、~250mg/L）的紅霉素可抑制未成熟生物被膜的形成，低濃度分組（<250mg/L）對(duì)生物被膜的抑制作用不明顯。
　　5.聯(lián)合應(yīng)用IDR-1018和紅霉素后，在低藥物濃度下（均為15mg/L）兩者聯(lián)合應(yīng)用即可產(chǎn)生較強(qiáng)的抑制生物被膜的作用。
　　結(jié)論:
　　1. IDR-1018能有效破壞已經(jīng)形成的MRSA生物被膜，即使在較低濃度下仍有作用；紅霉素在高濃度時(shí)有破壞生物被膜的作用，隨著濃度降低，其效果明顯減弱。